【摘 要】
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目的:构建人Ⅰ型11β羟基类固醇脘氢酶(11β-HSD1)原核表达载体并表达目的蛋白,为代谢综合征的研究奠定基础。方法:从HepG2细胞系中提取细胞总RNA,经反转录合成cDNA第一链后
【机 构】
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北京医院国家老年医学中心卫生部老年医学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(81471071,81270948);教育部留学回国人员科研启动基金资助项目(第46批,教外司[2013]693号)
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目的:构建人Ⅰ型11β羟基类固醇脘氢酶(11β-HSD1)原核表达载体并表达目的蛋白,为代谢综合征的研究奠定基础。方法:从HepG2细胞系中提取细胞总RNA,经反转录合成cDNA第一链后再以其为模版,扩增11β-HSD1基因。pET32a原核表达载体和PCR扩增出的产物经过BamHI和XhoI双酶切后,在16℃过夜的条件下用T4DNA连接酶连接上述酶切产物,然后用该产物转化Top10大肠杆菌感受态细胞,挑克隆后进行测序。将克隆成功的11β-HSD1重组质粒转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),分别用不同浓度
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