【摘 要】
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目的 探讨肉桂酰雷公藤内酯醇(T32)对γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)在SV40MES13小鼠肾小球系膜细胞表达及促增殖作用的影响.方法 采用(2～30)ng/mL T32和(1～500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共培养24 h,利用CCK-8法检测细胞生存率确定T32和IP-10最佳处理剂量;将对数生长期的SV40MES13细胞随机分为空白组、1000 U/mL γ干扰素(IFN-γ)刺激组、IFN-γ联合10 μmol/L吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组和IFN-γ联合(2
【机 构】
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福建中医药大学,福建福州350122;福建中医药大学附属人民医院检验科,福建福州350004
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目的 探讨肉桂酰雷公藤内酯醇(T32)对γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)在SV40MES13小鼠肾小球系膜细胞表达及促增殖作用的影响.方法 采用(2～30)ng/mL T32和(1～500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共培养24 h,利用CCK-8法检测细胞生存率确定T32和IP-10最佳处理剂量;将对数生长期的SV40MES13细胞随机分为空白组、1000 U/mL γ干扰素(IFN-γ)刺激组、IFN-γ联合10 μmol/L吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组和IFN-γ联合(2～20)ng/mLT32干预组.IFN-γ刺激24 h后,通过实时荧光定量PCR检测SV40MES13细胞IP-10 mRNA水平,ELISA检测SV40MES13细胞培养上清液IP-10分泌量;IFN-γ刺激20 min后,应用Western blot法检测SV40MES13细胞核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白核因子κB p65(NF-κB p65)、核因子κB抑制物α(IKBα)及其磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IκBα的表达.结果 IFN-γ刺激可促进SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达增加,与空白组相比,NF-KB p65、IκBα蛋白的磷酸化水平明显增加.采用特异性通路抑制剂PDTC阻断NF-κB信号通路后,与IFN-γ刺激组相比,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、IκBα蛋白磷酸化水平下降.与IFN-γ刺激组相比,经(2～20)ng/mL T32干预后,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、IKBα蛋白磷酸化水平分别下降44.22％和48.59％.(1～500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共同孵育24 h后,细胞生存率提高,IP-10剂量为10ng/mL时细胞生存率为119.83％,随后进入平台期;经(4～20)ng/mLT32干预后,细胞生存率与10 ng/mL IP-10刺激组相比明显降低.结论 IFN-γ诱导SV40MES13细胞表达IP-10的作用可被肉桂酰雷公藤内酯醇通过阻断NF-κB信号通路而下调,并抑制IP-10的促增殖作用.
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