【摘 要】
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目的 探讨重组腺病毒介导的多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA对阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM多药耐药表型的体外逆转作用.方法应用自行构建的携带反义MRP的重组腺病毒(Ad-Asmrp),在体外转染人肝癌耐药细胞,测定转染后细胞对阿霉素(ADM)及柔红霉素(DNR)的半数致死量(IC50)并计算耐药倍数(RF值);在转染后不同时间点用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化
【机 构】
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210029,南京医科大学第一附属医院普外科,四川大学华西医院普外科,成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室,成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室,成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室
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目的 探讨重组腺病毒介导的多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA对阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM多药耐药表型的体外逆转作用.方法应用自行构建的携带反义MRP的重组腺病毒(Ad-Asmrp),在体外转染人肝癌耐药细胞,测定转染后细胞对阿霉素(ADM)及柔红霉素(DNR)的半数致死量(IC50)并计算耐药倍数(RF值);在转染后不同时间点用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P190表达、并用RT-PCR反映细胞MRP之mRNA水平的变化.结果体外实验中,携带MRP反义RNA的重组腺病毒转染后的人肝癌耐药细胞对ADM、DNR的IC50分别为0.487 μg/ml、0.328 μg/ml,RF值分别为97.4、109.3,RF值分别下降36.8和35.4.在转染后24 h,MRP mRNA水平开始下降并呈持续下降趋势(P＜0.01),48 h后伴有P190蛋白表达的持续下降(P＜0.01),二者趋势一致.转染后48h,经流式细胞仪测得细胞内DNR浓度明显上升(P＜0.01).结论重组腺病毒介导的MRP反义RNA可有效封闭MRP基因表达,在体外实验中能增加人肝癌耐药细胞株对化疗药物的敏感性,对肝癌耐药细胞的MDR表型有较好的逆转作用。
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