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摘要[目的]比较金花葵不同部位化学成分差异，确定金花葵最佳药用部位。[方法]采用分光光度法检测金花葵不同部位（种子、果皮、花、茎、根）的总多糖、甘露醇、总黄酮和总皂苷的含量，并利用高效液相测定8种核苷类成分（尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷）。[结果]金花葵花的多糖、甘露醇、总黄酮、总皂苷含量均列前位，特别是总黄酮含量丰富；金花葵花的核苷类成分总含量也最高；而且花的化学成分含量与其余部位差距较大。[结论]金花葵花的有效成分含量较为丰富，是理想的药用部位。
关键词金花葵；不同部位；化学成分；药用部位
中图分类号S567.21文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）22-0090-03
Abstract[Objective]The research aimed to compare the chemical composition of different parts of A.manihot and determine the best medicinal parts of A.manihot.[Methods] Ultraviolet spectrophotometry was used to measure the total polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in different parts （seeds，pericraps，flowers，stems，roots） of A.manihot.And highperformance liquid chromatography was used to measure eight nucleosides （uracil，uridine，inosine，guanosine，adenine，thymidine，adenosine，2'-deoxyadenosine）.[Result] The polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in flowers of this herb were relatively higher，especially the total flavanoids.And the flower also showed the highest content of the eight nucleosides in this herb.Compared with other parts of A.manihot，the chemical components content in flowers was quite different from other parts of A.manihot.[Conclusion] The content of effective component was full of rich in the flowers，the flowers became useful as an important part of chemical constituent in A.manihot.
Key wordsAbelmoschus manihot；Different parts；Chemical constituents；Medicinal parts
金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]，別名菜芙蓉、野芙蓉、黏干或山榆皮，是一年生锦葵科秋葵属植物。金花葵富含黄酮，可有效清除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老以及癌症的发生，同时改善血液循环，可以降低胆固醇，从而降低心脑血管疾病的发病率[1]。研究还发现，金花葵含有丰富的活性成分，具有解热、抗炎、镇痛、降血脂、抗氧化、免疫调节等作用[2-6]，是极具开发价值的功能性食品。该研究拟对金花葵不同部位，包括种子、果皮、花、茎、根等开展功效成分比较研究，测定多糖、甘露醇、总黄酮等12个功效成分，并对不同部位成分含量进行比较研究，以期为这一珍贵资源深入开发及市场化提供数据支撑。
1材料与方法
1.1试验材料
金花葵植株来自艾兰汇公司金花葵种植基地，经云南大学虞泓教授鉴定为金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]。植株采集后分为种子、果皮、花、茎、根5个部分，干燥后粉碎，储于干燥器中备用。
1.2试验仪器
电子天平（德国Startorius集团，BP221S）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂，JYT-20A）；漩涡混合器（江苏海门市麒麟医用仪器厂，QL-901）；紫外分光光度计（北京市普析通用仪器有限公司，T6新世纪）；电动离心机（上海精科仪器仪表有限公司，80-2）；艾柯超纯水机（成都康宁实验专用纯水设备厂，KI-QP-I-10）；循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司，SHZ-DⅢ）；高速万能粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司，FW-100）；戴安高效液相色谱（戴安DIONEX公司，LPG-3400A 四元梯度泵，WPS-3000SL 自動进样器，PDA-3000 二极管阵列检测器，TCC-3000柱温箱，戴安原装ACCLAIM C18色谱柱，5 μm，4.6 mm×250 mm，“变色龙”控制分析色谱工作站软件）。
1.3试验试剂
硝酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、醋酸铵、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸钾、浓硫酸、盐酸、无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、苯酚、香兰素、中性氧化铝、D101型大孔树脂等均为国产分析纯，甲醇为色谱纯（Fisher Scientific），L-鼠李糖为国药集团化学试剂有限公司进口分装；甘露醇标准品、黄酮标准品和皂苷标准品购自中国药品生物制品检定所，尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷和2′-脱氧腺苷的标准品均购自Sigma公司，纯度为98%以上；水为蒸馏水。 1.4试验方法
1.4.1多糖的测定。
称取样品0.25 g左右放入心形瓶中，加入适量水在90 ℃水浴回流2 h后冷却并过滤，定容至50 mL。取待测样品溶液20 mL，放入蒸发皿中，在水浴70 ℃的条件下挥干。将挥干后的剩余物用2 mL蒸馏水溶解转移至15 mL离心管中，并加入10 mL无水乙醇，混匀，放置15～30 min。之后放入离心机中以4 000 r/min的速度离心10 min。取出离心管并弃掉上清液，再加入2 mL蒸馏水溶解沉淀物，加入10 mL无水乙醇混匀，重复上述步骤共3次。最后一次弃掉上清液后加入2 mL蒸馏水溶解沉淀物，定容至50 mL。之后取2 mL溶液至20 mL试管中，加入1 mL 50%苯酚溶液混匀，随后快速加入7 mL浓硫酸，混匀，放于40 ℃水浴中 30 min，再置于冰水浴中5 min，再放至室温。在490 nm处测定吸光度。进行3组重复。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.2甘露醇的测定。采用高碘酸钾法[7]进行测定。称取0.25 g左右金花葵试样，置于50 mL心形瓶中，加入适量水并回流2 h，过滤、定容至50 mL。随后取出1 mL待测样品溶液于试管中，加入1 mL高锰酸钾溶液，室温放置10 min，加入0.1% L-鼠李糖溶液2 mL并混合均匀，再加入新鲜配制的Nash溶液4 mL，混合均匀。之后在53 ℃水浴加热15 min，显色后冷却。在412 nm处测出吸光度。试验重复3次。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照。
1.4.3總皂苷的测定。
准确称取样品0.5000 g，加70%无水乙醇10 mL超声提取90 min，冷却后定容至刻度，摇匀，过夜，制得样品溶液。层析：用5 mL注射器垂直固定，并以3∶1的比例装填D101大孔树脂∶中性氧化铝。先用70%无水乙醇25 mL洗脱柱子，弃去洗脱液；再用25 mL蒸馏水洗脱柱子，弃去洗脱液；然后分别精确加入1 mL样品溶液，用25 mL蒸馏水洗脱柱子，弃洗脱液，用25 mL的70%无水乙醇洗脱柱子并收集于蒸发皿中，蒸干。用高氯酸和5%香草醛-冰醋酸溶液（4∶1）1 mL洗净蒸发皿，摇匀，并全部转移至具塞试管中，于60 ℃水浴中加热15 min，取出后立即用冰水冷却，加冰醋酸5 mL，摇匀，蒸馏水作空白，于560 nm处测定各吸光度，进行3组重复。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.4总黄酮的测定。精密称取待测样品0.5000 g置于试管内，加5 mL 70%乙醇到15 mL试管中混匀，室温放置72 h，之后将其混匀后置于离心管中以4000 r/min离心10 min，取上清液至具塞比色管中，备用。取2 mL上述已经制备好的供试品溶液，加入5% NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置 6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液10 mL，摇匀。然后加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15 min，在508 nm处测定吸光度。重复3组。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.5核苷类成分测定。
色谱条件：流动相为甲醇-水（10∶90）；流速1.0 mL/min；检测波长260 nm；柱温30 ℃。精密称取样品0.1000 g，加入3 mL 20%甲醇溶液，超声处理60 min，取出，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液过0.45 μm微孔滤膜，用于HPLC分析[8] 。
1.5数据分析
采用SPSS 19.0进行数据统计分析。LSD法检验差异显著性。利用多糖、甘露醇、总皂苷、总黄酮和8种核苷类成分含量，对金花葵不同部位化学成分进行Q-聚类分析。
2结果与分析
2.1金花葵不同部位多糖、甘露醇、总皂苷和总黄酮的含量
从表1可以看出，金花葵不同部位多糖含量從高到低依次为花、根、果皮、茎、种子；甘露醇含量从高到低依次为种子、花、茎、果皮、根；金花葵5个部位总皂苷含量平均值为10 000～12 000 μg/g，差异不显著；总黄酮在金花葵不同部位分布从高到低依次为花、茎、果皮、根、种子。金花葵花的多糖、总黄酮含量在5个部位中均为最高，且显著高于其他部位；甘露醇含量仅次于种子，总皂苷含量与其他部位并无差异，说明金花葵花是较理想的药用部位。
2.2金花葵不同部位核苷类成分含量
从表2可以看出，金花葵不同部位所含有的8种核苷类成分种类不尽相同，而且含量差别也较大，其中2′-脱氧腺苷均未检出。尿苷、鸟苷和腺嘌呤在5个部位均有分布，其中金花葵花的尿苷含量最高，为735.251 μg/g；金花葵种子鸟苷含量最高，为864.600 μg/g；金花葵花的腺嘌呤含量最高，达315.466 μg/g；而肌苷仅在金花葵根中检出，含量较低，仅为69.840 μg/g。检测的8种核苷类成分总含量中，金花葵不同部位从高到低依次为花、种子、根、茎、果皮。
2.3金花葵不同部位功效成分Q-聚类分析从图1可以看出，与大支分开的是花，其余4个部位的化学成分含量聚为一支；其中根、果皮和茎又聚为一支。
3讨论
金花葵在200多个秋葵植物中最具食用、药用、保健价值[6]，含有黄酮类、多糖、甘露醇、不饱和脂肪酸、微量元素等活性成分[9]。目前金花葵黄酮类成分药理研究较多，但金花葵总皂苷、核苷类等其他活性成分缺乏深入研究，且多种活性成分含量分布有待明晰。因此该研究针对不同部位检测了多糖、甘露醇、总皂苷、总黄酮及8种核苷类物质，共12种化学成分，较为全面地对金花葵的活性成分进行分析，且明确了化学成分在不同部位的分布。 药理试验证明，多糖、皂苷、黄酮类化合物以及核苷类成分均有抗氧化损伤、延缓衰老、抗肿瘤、抗癌抗菌、抗炎症等生物活性作用[10-19]；甘露醇具有利尿、降低颅内压和眼内压、镇咳、祛痰和平喘等功效[20]。该研究结果显示，金花葵花中多糖含量最高，达83 104.46 μg/g，且显著高于其他部位；金花葵种子中甘露醇含量为32 561.17 μg/g，金花葵花的甘露醇含量为6 490.31 μg/g，显著高于根、茎和果皮中甘露醇的含量，而其余3个部位甘露醇含量差异不显著；总皂苷在检测的5个部位中分布无显著差异，平均含量在10 000～12 000 μg/g；金花葵花中总黄酮含量最高，达22 299.62 μg/g，其余部位总黄酮含量均低于4 000.00 μg/g，说明金花葵花是较好的总黄酮来源。在检测的8种核苷类成分中，金花葵花的核苷类成分总量最高，达1 937.731 μg/g。同时Q-聚类分析显示，金花葵花的化学成分含量与其他部位区别较高。另外有研究表明，金花葵不同部位金丝桃苷含量从高到低依次为花、叶、茎、根、种子[21]；而种子中的微量元素含量普遍高于花[22]，同时金花葵种子含有丰富的不饱和脂肪酸[23]。
综上所述，金花葵花的有效化学成分含量较高，特别是总黄酮含量丰富，是较理想的药用部位；同时金花葵花的化学成分含量与其他部位差别较大，因此对金花葵整株入药或是花单独入药应制定不同的质量标准。而且根据不同的治疗目的，可以选用不同部位的金花葵入药以提高治疗效果。鉴于金花葵含有众多化学成分，应对其生理活性、作用机理等做进一步深入研究，為今后金花葵的临床应用提供科学依据。
参考文献
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关键词金花葵；不同部位；化学成分；药用部位
中图分类号S567.21文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）22-0090-03
Abstract[Objective]The research aimed to compare the chemical composition of different parts of A.manihot and determine the best medicinal parts of A.manihot.[Methods] Ultraviolet spectrophotometry was used to measure the total polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in different parts （seeds，pericraps，flowers，stems，roots） of A.manihot.And highperformance liquid chromatography was used to measure eight nucleosides （uracil，uridine，inosine，guanosine，adenine，thymidine，adenosine，2'-deoxyadenosine）.[Result] The polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in flowers of this herb were relatively higher，especially the total flavanoids.And the flower also showed the highest content of the eight nucleosides in this herb.Compared with other parts of A.manihot，the chemical components content in flowers was quite different from other parts of A.manihot.[Conclusion] The content of effective component was full of rich in the flowers，the flowers became useful as an important part of chemical constituent in A.manihot.
Key wordsAbelmoschus manihot；Different parts；Chemical constituents；Medicinal parts
金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]，別名菜芙蓉、野芙蓉、黏干或山榆皮，是一年生锦葵科秋葵属植物。金花葵富含黄酮，可有效清除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老以及癌症的发生，同时改善血液循环，可以降低胆固醇，从而降低心脑血管疾病的发病率[1]。研究还发现，金花葵含有丰富的活性成分，具有解热、抗炎、镇痛、降血脂、抗氧化、免疫调节等作用[2-6]，是极具开发价值的功能性食品。该研究拟对金花葵不同部位，包括种子、果皮、花、茎、根等开展功效成分比较研究，测定多糖、甘露醇、总黄酮等12个功效成分，并对不同部位成分含量进行比较研究，以期为这一珍贵资源深入开发及市场化提供数据支撑。
1材料与方法
1.1试验材料
金花葵植株来自艾兰汇公司金花葵种植基地，经云南大学虞泓教授鉴定为金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]。植株采集后分为种子、果皮、花、茎、根5个部分，干燥后粉碎，储于干燥器中备用。
1.2试验仪器
电子天平（德国Startorius集团，BP221S）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂，JYT-20A）；漩涡混合器（江苏海门市麒麟医用仪器厂，QL-901）；紫外分光光度计（北京市普析通用仪器有限公司，T6新世纪）；电动离心机（上海精科仪器仪表有限公司，80-2）；艾柯超纯水机（成都康宁实验专用纯水设备厂，KI-QP-I-10）；循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司，SHZ-DⅢ）；高速万能粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司，FW-100）；戴安高效液相色谱（戴安DIONEX公司，LPG-3400A 四元梯度泵，WPS-3000SL 自動进样器，PDA-3000 二极管阵列检测器，TCC-3000柱温箱，戴安原装ACCLAIM C18色谱柱，5 μm，4.6 mm×250 mm，“变色龙”控制分析色谱工作站软件）。
1.3试验试剂
硝酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、醋酸铵、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸钾、浓硫酸、盐酸、无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、苯酚、香兰素、中性氧化铝、D101型大孔树脂等均为国产分析纯，甲醇为色谱纯（Fisher Scientific），L-鼠李糖为国药集团化学试剂有限公司进口分装；甘露醇标准品、黄酮标准品和皂苷标准品购自中国药品生物制品检定所，尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷和2′-脱氧腺苷的标准品均购自Sigma公司，纯度为98%以上；水为蒸馏水。 1.4试验方法
1.4.1多糖的测定。
称取样品0.25 g左右放入心形瓶中，加入适量水在90 ℃水浴回流2 h后冷却并过滤，定容至50 mL。取待测样品溶液20 mL，放入蒸发皿中，在水浴70 ℃的条件下挥干。将挥干后的剩余物用2 mL蒸馏水溶解转移至15 mL离心管中，并加入10 mL无水乙醇，混匀，放置15～30 min。之后放入离心机中以4 000 r/min的速度离心10 min。取出离心管并弃掉上清液，再加入2 mL蒸馏水溶解沉淀物，加入10 mL无水乙醇混匀，重复上述步骤共3次。最后一次弃掉上清液后加入2 mL蒸馏水溶解沉淀物，定容至50 mL。之后取2 mL溶液至20 mL试管中，加入1 mL 50%苯酚溶液混匀，随后快速加入7 mL浓硫酸，混匀，放于40 ℃水浴中 30 min，再置于冰水浴中5 min，再放至室温。在490 nm处测定吸光度。进行3组重复。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.2甘露醇的测定。采用高碘酸钾法[7]进行测定。称取0.25 g左右金花葵试样，置于50 mL心形瓶中，加入适量水并回流2 h，过滤、定容至50 mL。随后取出1 mL待测样品溶液于试管中，加入1 mL高锰酸钾溶液，室温放置10 min，加入0.1% L-鼠李糖溶液2 mL并混合均匀，再加入新鲜配制的Nash溶液4 mL，混合均匀。之后在53 ℃水浴加热15 min，显色后冷却。在412 nm处测出吸光度。试验重复3次。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照。
1.4.3總皂苷的测定。
准确称取样品0.5000 g，加70%无水乙醇10 mL超声提取90 min，冷却后定容至刻度，摇匀，过夜，制得样品溶液。层析：用5 mL注射器垂直固定，并以3∶1的比例装填D101大孔树脂∶中性氧化铝。先用70%无水乙醇25 mL洗脱柱子，弃去洗脱液；再用25 mL蒸馏水洗脱柱子，弃去洗脱液；然后分别精确加入1 mL样品溶液，用25 mL蒸馏水洗脱柱子，弃洗脱液，用25 mL的70%无水乙醇洗脱柱子并收集于蒸发皿中，蒸干。用高氯酸和5%香草醛-冰醋酸溶液（4∶1）1 mL洗净蒸发皿，摇匀，并全部转移至具塞试管中，于60 ℃水浴中加热15 min，取出后立即用冰水冷却，加冰醋酸5 mL，摇匀，蒸馏水作空白，于560 nm处测定各吸光度，进行3组重复。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.4总黄酮的测定。精密称取待测样品0.5000 g置于试管内，加5 mL 70%乙醇到15 mL试管中混匀，室温放置72 h，之后将其混匀后置于离心管中以4000 r/min离心10 min，取上清液至具塞比色管中，备用。取2 mL上述已经制备好的供试品溶液，加入5% NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置 6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液10 mL，摇匀。然后加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15 min，在508 nm处测定吸光度。重复3组。以蒸馏水代替待测样品溶液，用同样方法操作作为空白对照[7]。
1.4.5核苷类成分测定。
色谱条件：流动相为甲醇-水（10∶90）；流速1.0 mL/min；检测波长260 nm；柱温30 ℃。精密称取样品0.1000 g，加入3 mL 20%甲醇溶液，超声处理60 min，取出，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液过0.45 μm微孔滤膜，用于HPLC分析[8] 。
1.5数据分析
采用SPSS 19.0进行数据统计分析。LSD法检验差异显著性。利用多糖、甘露醇、总皂苷、总黄酮和8种核苷类成分含量，对金花葵不同部位化学成分进行Q-聚类分析。
2结果与分析
2.1金花葵不同部位多糖、甘露醇、总皂苷和总黄酮的含量
从表1可以看出，金花葵不同部位多糖含量從高到低依次为花、根、果皮、茎、种子；甘露醇含量从高到低依次为种子、花、茎、果皮、根；金花葵5个部位总皂苷含量平均值为10 000～12 000 μg/g，差异不显著；总黄酮在金花葵不同部位分布从高到低依次为花、茎、果皮、根、种子。金花葵花的多糖、总黄酮含量在5个部位中均为最高，且显著高于其他部位；甘露醇含量仅次于种子，总皂苷含量与其他部位并无差异，说明金花葵花是较理想的药用部位。
2.2金花葵不同部位核苷类成分含量
从表2可以看出，金花葵不同部位所含有的8种核苷类成分种类不尽相同，而且含量差别也较大，其中2′-脱氧腺苷均未检出。尿苷、鸟苷和腺嘌呤在5个部位均有分布，其中金花葵花的尿苷含量最高，为735.251 μg/g；金花葵种子鸟苷含量最高，为864.600 μg/g；金花葵花的腺嘌呤含量最高，达315.466 μg/g；而肌苷仅在金花葵根中检出，含量较低，仅为69.840 μg/g。检测的8种核苷类成分总含量中，金花葵不同部位从高到低依次为花、种子、根、茎、果皮。
2.3金花葵不同部位功效成分Q-聚类分析从图1可以看出，与大支分开的是花，其余4个部位的化学成分含量聚为一支；其中根、果皮和茎又聚为一支。
3讨论
金花葵在200多个秋葵植物中最具食用、药用、保健价值[6]，含有黄酮类、多糖、甘露醇、不饱和脂肪酸、微量元素等活性成分[9]。目前金花葵黄酮类成分药理研究较多，但金花葵总皂苷、核苷类等其他活性成分缺乏深入研究，且多种活性成分含量分布有待明晰。因此该研究针对不同部位检测了多糖、甘露醇、总皂苷、总黄酮及8种核苷类物质，共12种化学成分，较为全面地对金花葵的活性成分进行分析，且明确了化学成分在不同部位的分布。 药理试验证明，多糖、皂苷、黄酮类化合物以及核苷类成分均有抗氧化损伤、延缓衰老、抗肿瘤、抗癌抗菌、抗炎症等生物活性作用[10-19]；甘露醇具有利尿、降低颅内压和眼内压、镇咳、祛痰和平喘等功效[20]。该研究结果显示，金花葵花中多糖含量最高，达83 104.46 μg/g，且显著高于其他部位；金花葵种子中甘露醇含量为32 561.17 μg/g，金花葵花的甘露醇含量为6 490.31 μg/g，显著高于根、茎和果皮中甘露醇的含量，而其余3个部位甘露醇含量差异不显著；总皂苷在检测的5个部位中分布无显著差异，平均含量在10 000～12 000 μg/g；金花葵花中总黄酮含量最高，达22 299.62 μg/g，其余部位总黄酮含量均低于4 000.00 μg/g，说明金花葵花是较好的总黄酮来源。在检测的8种核苷类成分中，金花葵花的核苷类成分总量最高，达1 937.731 μg/g。同时Q-聚类分析显示，金花葵花的化学成分含量与其他部位区别较高。另外有研究表明，金花葵不同部位金丝桃苷含量从高到低依次为花、叶、茎、根、种子[21]；而种子中的微量元素含量普遍高于花[22]，同时金花葵种子含有丰富的不饱和脂肪酸[23]。
综上所述，金花葵花的有效化学成分含量较高，特别是总黄酮含量丰富，是较理想的药用部位；同时金花葵花的化学成分含量与其他部位差别较大，因此对金花葵整株入药或是花单独入药应制定不同的质量标准。而且根据不同的治疗目的，可以选用不同部位的金花葵入药以提高治疗效果。鉴于金花葵含有众多化学成分，应对其生理活性、作用机理等做进一步深入研究，為今后金花葵的临床应用提供科学依据。
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