【摘 要】
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为了解下丘脑神经肽(kisspeptin)在施氏鲟(Acipenser schrenckii)生殖调控中的作用,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术首次克隆得到施氏鲟2个kisspeptin基因的全长
【机 构】
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上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江 哈尔滨 150070;上海海洋大学,水产科学国家级实验教学示范中心,上海 201306
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为了解下丘脑神经肽(kisspeptin)在施氏鲟(Acipenser schrenckii)生殖调控中的作用,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术首次克隆得到施氏鲟2个kisspeptin基因的全长cDNA序列,命名为kiss1和kiss2,并对它们编码氨基酸序列的特征及时空表达模式进行分析.结果表明,施氏鲟kiss1基因的cDNA全长为522 bp,编码130个氨基酸;kiss2基因的cDNA全长为518 bp,编码149个氨基酸;Kiss1和Kiss2均以 α-螺旋和无规则蜷曲为二级结构中的主要元件,且为含有信号肽、无跨膜结构、分泌到细胞外的不稳定亲水性蛋白质.氨基酸序列比对及进化分析表明,施氏鲟Kiss1和Kiss2具有高度保守区域,与达氏鲟(Acipenser dabryanus)Kiss1和Kiss2蛋白序列一致性最高,亲缘关系最近.荧光定量PCR结果显示,施氏鲟kiss1和kiss2的表达具有组织特异性,其中kiss1在性腺中的表达量最高,而kiss2在脑中的表达量最高.kiss2在早期性腺发育过程中的表达量检测显示,在孵化后0～49 d,kiss2的表达量较低,而kiss1的表达量则较高,在孵化后21 d达峰值;随着性腺的发育(孵化后64～199 d),kiss2的表达水平逐渐升高并在139 d达到最高,随后下降;与kiss2表达模式不同,kiss1的表达量在孵化后184 d达到峰值.以上结果表明,kisspeptin基因在施氏鲟早期性腺发育过程中具有重要的作用,且其调控功能存在差异.本实验为进一步阐明kiss1和kiss2的生理功能和分子调控机制奠定了理论基础.
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