【摘 要】
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目的 探讨Twist在肝细胞癌中的表达及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α的关系,观察Twist和HIF-1α基因干扰对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 免疫组织化学法检测106例肝细胞癌组织中转录因子Twist和HIF-1 α的表达;利用LipofectamineTM 2000转染Twist和HIF-1α小分子干扰RNA(siRNA)至HepG2细胞.实验分5组:Twist干扰组、HI
【机 构】
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430200武汉市第十四医院肿瘤科,武汉市江夏区疾病控制中心,武汉大学中南医院普外科
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目的 探讨Twist在肝细胞癌中的表达及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α的关系,观察Twist和HIF-1α基因干扰对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 免疫组织化学法检测106例肝细胞癌组织中转录因子Twist和HIF-1 α的表达;利用LipofectamineTM 2000转染Twist和HIF-1α小分子干扰RNA(siRNA)至HepG2细胞.实验分5组:Twist干扰组、HIF-1α干扰组、双重干扰组、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体);流式细胞仪检测细胞凋亡;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖活力;染色质免疫共沉淀法(ChIP)检测Twist和HIF-1α基因间的直接作用关系.结果 癌组织Twist的阳性表达率为66.98％,明显高于癌旁组织的17.92％(P＜0.05),Twist和HIF-1α的表达呈正相关(P＜0.05).与空白对照组(3.98％)和阴性对照组(4.26％)比较,Twist干扰组、HIF-1 α干扰组和双重干扰组细胞凋亡率分别为41.62％、43.84％和45.12％,干扰组细胞凋亡率均显著增加(P＜0.01),且干扰组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Twist干扰组、HIF-1α干扰组和双重干扰组细胞生长抑制率分别为30.2％、34.0％和35.8％,各干扰组间差异无统计学意义(P＞0.05).ChIP法证实在HepG2中Twist与HIF-1α启动子有直接作用.结论 Twist与HIF-1α基因表达呈正相关,表达下调后能诱导肝细胞癌HepG2细胞凋亡,并抑制其生长,双重干扰无明显协同作用,并且两基因间具有直接作用。
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