【摘 要】
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目的探讨微小核苷酸-211(microRNA-211，miR-211)与β-晶体蛋白B2(β-crystalin B2)参与的年龄相关性白内障的作用及其机制。方法通过CCK-8以及流式细胞术检测不同浓度双氧水或不同表达miR-211后HLEC-3细胞活性的变化。生物信息学方法预测miR-211与Notch2潜在的结合位点。Westren blot以及逆转录定量PCR(quantitative re
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第一医院眼科 150001,哈尔滨医科大学附属第一医院麻醉科 150001,哈尔滨医科大学附属第一医院眼科 150001
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目的探讨微小核苷酸-211(microRNA-211，miR-211)与β-晶体蛋白B2(β-crystalin B2)参与的年龄相关性白内障的作用及其机制。
方法通过CCK-8以及流式细胞术检测不同浓度双氧水或不同表达miR-211后HLEC-3细胞活性的变化。生物信息学方法预测miR-211与Notch2潜在的结合位点。Westren blot以及逆转录定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR)方法检不同表达miR-211后HLEC-3细胞中Nocth2蛋白以及Mrna的变化。采用荧光素酶报告方法确认miR-211与Notch2的靶向性。Western blot检测单独miR-211或共表达miR-211＋Notch2或低表达Notch2后β-crystallin B2蛋白的变化。
结果过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)能够明显降低HLCE-3细胞的活性(t＝3.67，P<0.05)。下调miR-211可以明显抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞(HLEC-B3)凋亡(t＝4.07，P<0.05)；上调miR-211则可以显著地加重氧化因子表达(t＝4.21，P<0.05)。同时，荧光素酶(luciferase)和Western blot研究实验表明，上调miR-211靶向抑制Notch2的表达(t值分别为4.02和3.90，P值均<0.05)。与此相一致的是，下调miR-211则可以恢复Notch2的蛋白表达水平(t＝4.04，P<0.05)。除了Notch2之外，miR-211 inhibitor也可以增加β-crystallin B2的表达，而沉默Notch2表达后，则可以明显抑制由miR-211 inhibitor引起的β-crystallin B2表达升高(t值分别为4.20，4.19和4.15，P值均<0.05)。
结论miR-211靶向调控Notch2表达使β-crystallin B2的表达增加，表明miR-211可能是治疗年龄相关白内障的潜在药物靶点。
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