【摘 要】
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目的:在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因, 并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清.方法:应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2 cDNA, 构建重组表达载
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院,中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室
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目的:在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因, 并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清.方法:应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2 cDNA, 构建重组表达载体pET-28a-OCILrP2, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 以IPTG诱导表达His-OCILrP2融合蛋白.以表达产物免疫SD大鼠, 制备大鼠抗OCILrP2的抗血清.采用Western blot测定其效价和特异性.结果:RT-PCR法扩增出235 bp的OCILrP2基因, 其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致.以构建的重组质粒pET-28a-OCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达.以表达的His-OCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清.Western blot分析表明, 该抗血清均可与原核表达的His-OCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2-Ig融合蛋白特异性结合;抗血清的效价为1:2 000.结论:在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白, 制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清, 为进一步研究OCILrP2的生物学功能奠定了基础.
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