【摘 要】
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目的 分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体.方法 通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能.以MAGE-D4/pMAL
【机 构】
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广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院病理科,广西南宁530021;广西高校生物分子医学研究重点实验室,广西南宁530021;广西医科大学基础
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目的 分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体.方法 通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能.以MAGE-D4/pMAL-C2原核重组质粒为模板,经PCR扩增、酶切后与pEGFP-Cl真核表达质粒连接,转化大肠杆菌.连接产物经抗生素筛选、酶切、测序鉴定后,通过脂质体转染A549肺癌细胞.结果 MAGE-D4蛋白为不稳定亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽,二级结构以α螺旋为主,具有多个功能性修饰位点,主要定位在细胞核.SLLLVILGV可能为MAGE-D4来源的HLA-A* 0201限制性T细胞表位.与MAGE-D4存在潜在相互作用的前3位蛋白依次是染色体成分4非结构维持蛋白同源物A(NSMCE4A)、T细胞识别的黑素瘤抗原1(MLANA/MART-1)、黑素瘤B抗原5(BAGE5).测序结果证实重组质粒含有MAGE-D4的全长编码序列(CDS),能成功转染A549肺癌细胞.结论 MAGE-D4蛋白为不稳定核蛋白,可通过与多种黑素瘤相关蛋白相互作用而发挥功能,其来源的短肽可能具有较强的免疫原性,并构建了MAGE-D4真核表达载体.
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