【摘 要】
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目的 原核表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒核蛋白(nuclear protein,NP). 方法 从H5N1A/meerkat/Shanghai/2012(SH-1),2.3.2.1中提取总RNA,反转录为cDNA后采用PCR扩增NP基因,
【机 构】
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河南大学基础医学院,抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室,河南开封475004;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
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目的 原核表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒核蛋白(nuclear protein,NP). 方法 从H5N1A/meerkat/Shanghai/2012(SH-1),2.3.2.1中提取总RNA,反转录为cDNA后采用PCR扩增NP基因,构建重组质粒经双酶切、测序鉴定正确后转入BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白的表达,纯化后进行结合活性鉴定. 结果 构建的重组质粒H5N1 NP经双酶切及测序鉴定正确,转化入大肠埃希菌后表达NP蛋白,SDS-PAGE分析其相对分子质量为70×103,与理论值相符.ELISA法检测NP蛋白与相应抗体具有结合活性. 结论 实现了禽流感病毒H5N1NP重组蛋白的原核表达,表达蛋白具有结合活性,为进一步研究NP蛋白的功能和诊断用单抗的研发奠定了基础.
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