【摘 要】
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目的 建立小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断.方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM
【机 构】
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空军军医大学实验动物中心,西安710032
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目的 建立小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断.方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测.结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清.包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4.0 μg/mL(10-7.73/0.1 mL TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5.13％和5.57％;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒Ⅲ型(Re03)、小鼠细小病毒(MVM)和鼠痘病毒(Ect)阳性血清均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于10％.对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97.37％ (37/38),阴性血清相符率92.19％ (118/127).结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断.
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