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目的
观察布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspE的原核表达、免疫反应原性，以及重组蛋白BspE对细胞因子的影响。
方法根据GenBank中公布的羊种布鲁菌M5-90的BspE基因，合成基因片段，将其连接到PUC57载体测序，将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体pET-28α上，转化入大肠埃希菌DE3感受态细胞中诱导表达，Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白，蛋白质免疫印迹（Western blot）法分析其反应原性。25 g/L BspE重组蛋白作用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，对照组采用相同含量的牛血清白蛋白（BSA）替代BspE，作用12、24、48 h，酶联免疫吸附试验检测白细胞介素（IL）-1β水平。
结果成功获得pET-28α-BspE重组表达质粒；Western blot结果显示，出现相对分子质量约为30.1 × 103的条带，纯化后条带单一，BspE重组蛋白具有较好的反应原性。与BSA组比较，BspE蛋白可显著提高IL-1β（ng/L）的水平（12 h：43.27 ± 2.13比30.24 ± 1.66、24 h：57.78±3.44比41.22 ± 1.22、48 h：72.52 ± 3.04比46.77 ± 2.75，t = 8.38、7.86、10.89，P均< 0.05)。
结论BspE原核表达后具有较好的免疫反应原性，并可提高小鼠巨噬细胞IL-1β的表达水平，为效应蛋白在布鲁菌致病机制中作用的研究提供科学依据。