探讨钙网蛋白对RA成纤维样滑膜细胞(FLS)存活的影响,为深入揭示钙网蛋白在RA发病机制中的作用及寻找新的治疗靶点奠定实验基础。
方法采用胶原酶消化法分离RA和OA患者滑膜组织中的FLS并进行体外培养。应用实时荧光定量-聚合酶链反应(q-PCR)、蛋白质印迹法以及细胞免疫荧光等技术,检测RA和OA FLS中抗凋亡分子Bcl-XL和Mcl-1的表达;进一步应用q-PCR、蛋白质印迹法检测在不同浓度钙网蛋白刺激下,RA和OA FLS中Bcl-XL和Mcl-1的表达;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测钙网蛋白对RA FLS增殖的影响;采用t检验及单因素方差分析进行统计学分析。
结果① RA FLS中抗凋亡分子Bcl-XL和Mcl-1的mRNA表达水平(14.51±2.20; 12.82±1.80)与OA对照组(1.00±0.39; 1.00±0.46)相比均明显升高(t=10.47,11.02;P均<0.01);RA FLS中Bcl-XL和Mcl-1的蛋白表达水平较OA对照组也明显升高;RA FLS中Bcl-XL和Mcl-1荧光染色与OA对照组相比显著增强。②钙网蛋白可使RA FLS中Bcl-XL和Mcl-1的表达上调:钙网蛋白刺激浓度为10 ng/ml和50 ng/ml时,RA FLS中Bcl-XL的mRNA表达水平(1.70±0.28; 1.87±0.35)较对照组(1.00±0.20)明显升高(q=4.58 ,5.69;P< 0.05);Mcl-1的mRNA表达水平(1.85±0.36; 1.72±0.26)较对照组(1.00±0.20)也明显升高(q=5.63 ,4.77;P< 0.05);不同浓度的钙网蛋白作用后,OA FLS中Bcl-XL和Mcl-1的mRNA表达水平没有明显的改变(F= 1.49,1.60;P>0.05 );钙网蛋白作用后,RA FLS中Bcl-XL和Mcl-1的蛋白表达水平呈浓度依赖性升高,而OA FLS中二者的蛋白表达水平没有明显的变化。③ MTT结果显示钙网蛋白对RA FLS增殖没有显著作用(F=2.88 ,P>0.05)。
结论钙网蛋白可能通过上调抗凋亡分子Bcl-XL和Mcl-1的表达进而抑制凋亡,促进RA FLS的存活。