为了评价温度、水量、放置方式3种因素对土荆芥果实挥发油熏蒸抑菌活性的影响，采用对扣法分别测定了土荆芥果实挥发油在不同温度、水量、培养皿放置方式等条件下，对番茄灰霉病菌、莴苣菌核病菌和水稻胡麻斑病菌3种植物病原真菌的熏蒸抑制作用。结果显示，土荆芥果实挥发油对3种病原菌的熏蒸抑菌率随着温度的升高呈现先下降后上升的规律，与菌落直径呈现的规律相反，最低抑菌率分别出现在20℃、20℃和30℃，此温度位于3种菌的最适生长温度范围内；随着水量的增加，熏蒸抑菌率逐渐降低，最低水量的5μL／皿处理与更高水量的处理间存在差异性；倒置培养条件下对3种菌的熏蒸抑菌率均大于正置培养，其中对番茄灰霉病菌和莴苣菌核病菌的抑菌率2种方式间存在显著或极显著差异。研究证实，在病原菌的最适生长温度条件下，土荆芥果实挥发油的熏蒸活性最低；随着水量的增加，熏蒸活性逐渐降低；倒置培养方式优于正置培养。