【摘 要】
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目的 探究磷酸弗林酸性簇分选蛋白2（PACS-2）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大的影响及其机制。方法 剪取并消化出生1～2 d的SD大鼠乳鼠的心脏组织，采用差速贴壁法获取乳鼠心肌细胞（NRCMs）,原代培养24 h。以浓度为1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,采用Western blot方法检测细胞中FUN14域蛋白1（FUNDC1）、PACS-2、三
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81970253）； 山东省自然科学基金重大基础研究项目（ZR2019ZD28）；
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目的 探究磷酸弗林酸性簇分选蛋白2（PACS-2）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大的影响及其机制。方法 剪取并消化出生1～2 d的SD大鼠乳鼠的心脏组织，采用差速贴壁法获取乳鼠心肌细胞（NRCMs）,原代培养24 h。以浓度为1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,采用Western blot方法检测细胞中FUN14域蛋白1（FUNDC1）、PACS-2、三磷酸肌醇受体蛋白（IP3R）的表达水平，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测细胞中心钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA的表达水平。将NRCMs分为A～C组，A组使用无血清培养基培养，B、C组分别转染si-NC和si-PACS-2,采用Western blot方法检测各组细胞中PACS-2蛋白的表达水平。将NRCMs分为D～G组，D组使用无血清培养基培养，E组以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养，F、G组分别转染si-NC、si-PACS-2后再以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养，采用TRITC-鬼笔环肽染色技术检测各组心肌细胞表面积，RT-qPCR检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平，以Fluo-4,AM探针检测各组细胞胞质Ca2+的水平。将NRCMs分为H～K组，H组使用无血清培养基培养，I、J组分别转染si-NC、si-PACS-2,K组转染si-PACS-2并且以浓度1μmol/L的钙调蛋白（CaM）拮抗剂处理后，采用RT-qPCR方法检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平。结果 以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h, NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平呈时间依赖性上调（F=25.73～58.30,P＜0.05）,并且处理第24小时时相较于第0小时时均显著上调（t=5.35～37.50,P＜0.05）。以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h, NRCMs中IP3R、PACS-2以及FUNDC1蛋白的表达水平均呈时间依赖性下调（F=5.37～9.07,P＜0.05）,并且处理第24小时时相较于第0小时时显著下调（t=6.55～7.42,P＜0.05）。与B组相比，C组NRCMs中PACS-2蛋白的表达水平显著下调（t=5.92,P＜0.05）。与F组相比，G组NRCMs中心肌细胞表面积增大，ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平及胞质Ca2+水平均上调（t=3.50～26.60,P＜0.05）。与J组相比，K组NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA表达水平均显著下调（t=3.27～5.13,P＜0.05）。结论 敲低PACS-2可增加NRCMs中胞质Ca2+水平，并且可能以Ca2+-CaM依赖的方式加重AngⅡ诱导的心肌肥大的发生。
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