【摘 要】
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目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白(Env)突变体pSM-HXB2-DIV/DIM/SIM和PSM-LAI-DIV四种表达质粒，并构建了含有547D突变并置换HXB2或LAI株gp120部分的Env质粒，pSM-LAI gp120/HXB2 gp41-DIV (L/H-DIV)和pS
【机 构】
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150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，伍连德研究所，黑龙江省感染与免疫重点实验室，黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室,150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，伍连德研究所，黑龙江省
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目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。
方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白(Env)突变体pSM-HXB2-DIV/DIM/SIM和PSM-LAI-DIV四种表达质粒，并构建了含有547D突变并置换HXB2或LAI株gp120部分的Env质粒，pSM-LAI gp120/HXB2 gp41-DIV (L/H-DIV)和pSM-HXB2 gp120/LAI gp41-DIV(H/L-DIV)。假病毒感染实验和细胞融合实验分析Env的功能；Western blot检测Env表达。圆二色谱(CD)分析6螺旋束(6HB)的稳定性；PyMOL软件分析含有547D的6HB结构。
结果HXB2为骨架的547 DIV、DIM及SIM和LAI为骨架的DIV假病毒的感染性低于其野生型(wt)，前者的各变异Env的融合活性也明显降低；L/H-DIV假病毒感染性与HXB2 wt相似，但融合活性明显低于wt；H/L-DIV假病毒的感染性低于两种野生型，融合活性与LAI wt相似，但低于HXB2 wt。CD结果证明547D突变降低6HB的稳定性；结构分析显示，547D突变没有改变NHR中该位点与CHR中Q652位点之间的氢键，但可能通过增加NHR的负电荷从而减少病毒与T20的结合。
结论547D突变降低LAI与HXB2株的感染性和HXB2株的融合活性；该突变通过降低6HB稳定性和增加gp41所带负电荷来减少病毒与T20的结合。
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