【摘 要】
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目的 探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法 设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片
【机 构】
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第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室
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目的 探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法 设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片段 ,用尿嘧啶 DNA糖基化酶 (UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后 ,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键 ,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳 (PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果。结果 本实验选用的基因当dUTP与dTTP的比例在 3∶7～ 1∶1时 ,都能够获得比较理想的片段化结果。结论 通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果。
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