【摘 要】
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以食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)总DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.3kb的α-淀粉酶基因保守区片段amyC.经双酶切插入到表达载体pET-32a的Ncol和Notl之间,转化大肠杆
【机 构】
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中国药科大学 生命科学与技术学院,江苏南京210009
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以食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)总DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.3kb的α-淀粉酶基因保守区片段amyC.经双酶切插入到表达载体pET-32a的Ncol和Notl之间,转化大肠杆菌BL21 (DE3)菌株.经IPTG诱导表达后,发酵液淀粉酶总活性为3623u/L,培养液上清和细胞破碎液上清均有淀粉酶活性,分别为3.3u/mL和14.1u/mL.破碎上清经镍柱纯化后,得到单一的目的条带,纯化蛋白的比活力为26.9u/mg蛋白,比纯化前(3.9u/mg蛋白)提高了大约7倍.
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