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摘要：目的：探讨急性心肌缺血家兔电针前后血小板膜糖蛋白（GMP-140）、血小板活化因子（PAF）含量的影响。
方法：将32只健康家兔完全随机分为4组：空白组、假手术组、模型组，模型电针组，每组8只。空白组不予任何处理，假手术组开胸暴露心脏，于冠状动脉下只挂线但不结扎；模型组通过结扎家兔左冠状动脉前降支制作急性心肌缺血模型。模型电针组是在造模成功即刻，针刺双侧内关，并在电针后取各组家兔的血液标本，采用标记的125Ⅰ单抗夹心法检测GMP-140、酶联免疫分析法检测PAF含量。
结果：①四组家兔在造模前心电图ST段无显著性差异；假手术组家兔在造模即刻及造模后ST段虽有增加，但与空白组比较无统计学意义（P>0.05），模型组在造模即刻和造模后30minST段电位显著升高，与假手术组和空白组比均有显著性差异（P<0.01），提示急性心肌缺血造模成功。模型电针组在造模并电针30min后，心电图ST段电位较假手术组和空白组虽明显升高，但显著低于模型组（P<0.05）。②假手术组家兔血清GMP-140和PAF含量虽有变化，但与空白组比较，没有显著性差异（P>0.05）。③模型组家兔造模后30minGMP-140和PAF含量较假手术组和空白组均明显升高，有极显著性差异（P<0.01）。④模型电针组电针30min后GMP-140和PAF的含量低于模型组（P<0.05），GMP-140、PAF的含量与假手术组和空白组比较仍然升高，无显著性差异（P<0.05）。
结论：电针内关穴能降低急性心肌缺血家兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）、血小板活化因子（PAF）含量水平，调整血小板活性功能，改善血液的病理状态，改善急性心肌缺血。
关键词：电针内关急性心肌缺血家兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）血小板活化因子（PAF）
【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1008-1879（2012）10-0002-02
缺血性心脏病（ischemic heart disease，IHD）是由于冠状动脉循环改变引起冠状血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，是一类严重危害人类身体健康的常见疾病。是中老年常见多发的后天性心脏病，具有较高的发病率和致死率，已成为二十一世纪影响人类健康的主要疾病之一，无论在发达国家还是在发展中国家，都是致残和致死的重要病因。
近年来发现血小板功能和本病发病密切相关[1，2]。大量临床研究证实针灸治疗缺血性心脏病具有较好的疗效。在针灸内关穴治疗心肌缺血的实验研究中，对缺血再灌注的研究较多，而对血小板变化影响的研究尚未见报道。本研究从血小板活化角度探讨电针内关穴是否具有调整血小板活性功能的作用，为针灸临床治疗缺血性心脏病科学内涵和内在机制提供相关证据并探索研究思路。
1材料与方法
1.1实验动物与分组。健康家兔，雌雄各半，体重1.8-2.3kg，共32只，由湖南农业大学动物科技学院提供。清洁级。
将实验兔随机分为空白组、假手术组、模型组、模型电针组，每组8只。
1.2主要仪器与试剂。兔血小板活化因子（PAF）试剂盒（长沙安迪生物科技有限公司）；兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）试剂盒（苏州大学医学院止血与血栓研究所）；乌拉坦，BL-420F多通道生物信号采集处理系统（成都泰盟科技有限公司）；G6805-Ⅱ型电针治疗仪（上海医疗电子仪器厂生产），离心机（长沙科威实业有限公司）等。
1.3动物模型制备。参照Simpson方法。将实验兔用20%乌拉坦（4m1/kg）行耳缘静脉注射麻醉后，仰卧固定于兔台上，铺上消毒孔巾，在胸骨柄稍下方至胸骨剑突上方约2cm处，作正中皮肤切口，沿胸骨左缘分离胸壁肌肉，并剪断左侧第3、4肋软骨（注意紧贴胸骨左缘开胸，以免伤及左侧内乳动脉和造成气胸）。然后用开胸器暴露心脏，用眼科剪将心包膜前部剪开，用开胸器挂上心包膜后，在心前壁左侧用细圆针穿0号丝线缝一针，并以此为引线使心脏略向右旋，暴露左心耳及大部分左心室，再在左心耳下缘仔细寻找左冠状动脉前降支，并于左室壁上、中1/3交界处，以细圆针穿入血管下缝一针，用丝线结扎血管，阻断冠状血流。收紧结扎线后，左室前壁发纷向外膨胀及心电图ST段抬高、T波高耸，表示急性心肌缺血模型制作成功。假手术组动物只开胸暴露心脏，挂线但不结扎冠状动脉。
1.4针刺方法。按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》，取家兔内关穴，另取双下肢对称任取一点作为电针电极固定部位。在结扎左冠状动脉前降支后，用华佗牌0.5寸不锈钢无菌针针刺双侧内关和双下肢任一部位，均直刺0.5-1cm，同侧上下肢分别接通G6805-Ⅱ型电针治疗仪，连续波，频率2Hz，强度1mA，以动物肢体轻微抖动为度，留针30min。
1.5GMP-140和PAF检测。均采用颈动脉采血6ml，空白组：记录心电图后即可采血；假手术组：于挂线术后，静置30min后记录心电图并采血。模型组：于造模30min后记录心电图并采血。电针组：造模成功后电针30min取针，记录心电图并采血；静置30min后，4℃，3000rpm，离心10min；取管中上清液，放入Tip管中，-20℃冰冻保存。
各组治疗前后心电图均采用BL-420F多通道生物信号分析系统采集，记录Ⅱ导联心电图。各组分别于造模前、造模即刻、造模后30min每次记录5min，观察测量ST段电位变化；指标检测全部操作按说明书进行。
1.6統计方法。计量资料以例数，均数±标准差（n，X±S）表示，多组间比较方差齐时用单因素方差分析，两两比较用q检验，方差不齐时用秩和检验；自身前后比较采用配对t检验。统计分析采用SPSS16.0统计软件进行处理。
2结果
方法：将32只健康家兔完全随机分为4组：空白组、假手术组、模型组，模型电针组，每组8只。空白组不予任何处理，假手术组开胸暴露心脏，于冠状动脉下只挂线但不结扎；模型组通过结扎家兔左冠状动脉前降支制作急性心肌缺血模型。模型电针组是在造模成功即刻，针刺双侧内关，并在电针后取各组家兔的血液标本，采用标记的125Ⅰ单抗夹心法检测GMP-140、酶联免疫分析法检测PAF含量。
结果：①四组家兔在造模前心电图ST段无显著性差异；假手术组家兔在造模即刻及造模后ST段虽有增加，但与空白组比较无统计学意义（P>0.05），模型组在造模即刻和造模后30minST段电位显著升高，与假手术组和空白组比均有显著性差异（P<0.01），提示急性心肌缺血造模成功。模型电针组在造模并电针30min后，心电图ST段电位较假手术组和空白组虽明显升高，但显著低于模型组（P<0.05）。②假手术组家兔血清GMP-140和PAF含量虽有变化，但与空白组比较，没有显著性差异（P>0.05）。③模型组家兔造模后30minGMP-140和PAF含量较假手术组和空白组均明显升高，有极显著性差异（P<0.01）。④模型电针组电针30min后GMP-140和PAF的含量低于模型组（P<0.05），GMP-140、PAF的含量与假手术组和空白组比较仍然升高，无显著性差异（P<0.05）。
结论：电针内关穴能降低急性心肌缺血家兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）、血小板活化因子（PAF）含量水平，调整血小板活性功能，改善血液的病理状态，改善急性心肌缺血。
关键词：电针内关急性心肌缺血家兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）血小板活化因子（PAF）
【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1008-1879（2012）10-0002-02
缺血性心脏病（ischemic heart disease，IHD）是由于冠状动脉循环改变引起冠状血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，是一类严重危害人类身体健康的常见疾病。是中老年常见多发的后天性心脏病，具有较高的发病率和致死率，已成为二十一世纪影响人类健康的主要疾病之一，无论在发达国家还是在发展中国家，都是致残和致死的重要病因。
近年来发现血小板功能和本病发病密切相关[1，2]。大量临床研究证实针灸治疗缺血性心脏病具有较好的疗效。在针灸内关穴治疗心肌缺血的实验研究中，对缺血再灌注的研究较多，而对血小板变化影响的研究尚未见报道。本研究从血小板活化角度探讨电针内关穴是否具有调整血小板活性功能的作用，为针灸临床治疗缺血性心脏病科学内涵和内在机制提供相关证据并探索研究思路。
1材料与方法
1.1实验动物与分组。健康家兔，雌雄各半，体重1.8-2.3kg，共32只，由湖南农业大学动物科技学院提供。清洁级。
将实验兔随机分为空白组、假手术组、模型组、模型电针组，每组8只。
1.2主要仪器与试剂。兔血小板活化因子（PAF）试剂盒（长沙安迪生物科技有限公司）；兔血小板膜糖蛋白（GMP-140）试剂盒（苏州大学医学院止血与血栓研究所）；乌拉坦，BL-420F多通道生物信号采集处理系统（成都泰盟科技有限公司）；G6805-Ⅱ型电针治疗仪（上海医疗电子仪器厂生产），离心机（长沙科威实业有限公司）等。
1.3动物模型制备。参照Simpson方法。将实验兔用20%乌拉坦（4m1/kg）行耳缘静脉注射麻醉后，仰卧固定于兔台上，铺上消毒孔巾，在胸骨柄稍下方至胸骨剑突上方约2cm处，作正中皮肤切口，沿胸骨左缘分离胸壁肌肉，并剪断左侧第3、4肋软骨（注意紧贴胸骨左缘开胸，以免伤及左侧内乳动脉和造成气胸）。然后用开胸器暴露心脏，用眼科剪将心包膜前部剪开，用开胸器挂上心包膜后，在心前壁左侧用细圆针穿0号丝线缝一针，并以此为引线使心脏略向右旋，暴露左心耳及大部分左心室，再在左心耳下缘仔细寻找左冠状动脉前降支，并于左室壁上、中1/3交界处，以细圆针穿入血管下缝一针，用丝线结扎血管，阻断冠状血流。收紧结扎线后，左室前壁发纷向外膨胀及心电图ST段抬高、T波高耸，表示急性心肌缺血模型制作成功。假手术组动物只开胸暴露心脏，挂线但不结扎冠状动脉。
1.4针刺方法。按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》，取家兔内关穴，另取双下肢对称任取一点作为电针电极固定部位。在结扎左冠状动脉前降支后，用华佗牌0.5寸不锈钢无菌针针刺双侧内关和双下肢任一部位，均直刺0.5-1cm，同侧上下肢分别接通G6805-Ⅱ型电针治疗仪，连续波，频率2Hz，强度1mA，以动物肢体轻微抖动为度，留针30min。
1.5GMP-140和PAF检测。均采用颈动脉采血6ml，空白组：记录心电图后即可采血；假手术组：于挂线术后，静置30min后记录心电图并采血。模型组：于造模30min后记录心电图并采血。电针组：造模成功后电针30min取针，记录心电图并采血；静置30min后，4℃，3000rpm，离心10min；取管中上清液，放入Tip管中，-20℃冰冻保存。
各组治疗前后心电图均采用BL-420F多通道生物信号分析系统采集，记录Ⅱ导联心电图。各组分别于造模前、造模即刻、造模后30min每次记录5min，观察测量ST段电位变化；指标检测全部操作按说明书进行。
1.6統计方法。计量资料以例数，均数±标准差（n，X±S）表示，多组间比较方差齐时用单因素方差分析，两两比较用q检验，方差不齐时用秩和检验；自身前后比较采用配对t检验。统计分析采用SPSS16.0统计软件进行处理。
2结果