【摘 要】
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提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因全长.结果显示,该基因全长843 bp,ORF为717 bp,编码239个氨基酸,计算
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提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因全长.结果显示,该基因全长843 bp,ORF为717 bp,编码239个氨基酸,计算相对分子质量为26 800,等电点为6.07.经Blast分析,该序列与基因库中的淀粉液化芽孢杆菌(M15674)同源性最高(97%).该基因已被GenBank接受(AY205562.1).用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建了重组表达载体pET-amy,并导入BL21细菌中表达,酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在26 000左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活这90.74 U/mL,是出发菌的3倍,最适温度在60℃左右,pH值在4～10之间.该工程菌可作为酶活高的理想材料,用以构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌.
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