探讨微小RNA(miR)-203靶向RGS17蛋白对食管癌细胞增殖、周期和迁移的影响。
方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常食管上皮细胞HEEC、食管癌细胞TE-8、EC9706和EC-11中miR-203表达水平。将对数生长期食管癌细胞EC9706分为对照组和miR-203组,分别采用对照组和miR-203过表达慢病毒感染,筛选稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖能力;采用流式细胞术分析两组细胞凋亡和周期变化;采用Transwell实验分析两组细胞迁移能力;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-203靶基因;采用蛋白免疫印迹分析靶基因及相关蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。
结果正常食管上皮HEEC细胞miR-203表达水平(1.19±0.17)明显高于食管癌TE-8、EC9706和EC-11细胞miR-203表达水平(0.56±0.11、0.39±0.09、0.47±0.10),差异有统计学意义(t=3.719、4.498、3.909,P<0.05)。对照组细胞miR-203表达水平(1.07±0.12)明显低于miR-203组细胞miR-203表达水平(3.41±0.19),差异有统计学意义(t=5.576,P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值(1.95±0.19)明显高于miR-203细胞A值(1.36±0.16),差异有统计学意义(t=3.274,P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(69.94±6.51)%]明显高于miR-203组细胞克隆形成率[(39.55±4.91)%],差异有统计学意义(t=5.901,P<0.05)。对照组细胞G0/G1期比例[(40.27±5.71)%]明显低于miR-203组细胞G0/G1期比例[(54.90±5.98)%],差异有统计学意义(t=3.821,P<0.05)。对照组细胞S期比例[(30.16±4.20)%]明显高于miR-203组细胞S期比例[(21.85±4.09)%],差异有统计学意义(t=3.019,P<0.05)。对照组细胞G2/M期比例[(28.86±3.57)%]明显高于miR-203组细胞G2/M期细胞比例[(24.66±4.01)%],差异有统计学意义(t=2.621,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(146.38±16.10)个]明显高于miR-203组细胞迁移数量[(85.32±10.57)个],差异有统计学意义(t=6.926,P<0.05)。RGS17是miR-203的靶基因。对照组细胞RGS17表达水平(3.09±0.31)明显高于miR-203组细胞RGS17表达水平(1.74±0.20),差异有统计学意义(t=5.194,P<0.05)。
结论miR-203通过靶向RGS17蛋白调控食管癌细胞增殖、凋亡、周期和迁移。