【摘 要】
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以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶nag565基因,构建nag565-p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经过分析与预测,nag565
【机 构】
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华中农业大学水产学院; 中国农业科学院饲料研究所;
【基金项目】
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“十二五”国家科技计划农村领域项目(2013BAD10B01-2-3,2012BAD25BD203);北京市鲟鱼、鲑鳟鱼产业技术体系项目(SCGWZJ20141104-4);海洋公益性行业科研专项经费项目(201305022-6)资助项目
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以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶nag565基因,构建nag565-p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经过分析与预测,nag565氨基酸序列与其他气单胞菌属相似,NAG565蛋白序列分析预测其含有一个信号肽、一个碳水化合物结合结构域、两个糖苷水解酶20家族催化结构域和一个β-氨基葡萄糖苷酶C端结构域。通过NiNTA纯化获得的NAG565纯蛋白比活为7328U/mg,并对其酶学性质进行了初步研究,NAG565在p H7.0保持最高活性,并且在p H5.0~9.0范围内稳定,最适温度为37℃,0~30℃对其酶活无明显影响,并对多种金属离子和蛋白酶具有良好抗性,符合水产动物的养殖环境条件(养殖温度20~30℃,多数养殖鱼胃肠道p H值呈中性并含有蛋白酶),为其在水产养殖等领域的应用提供了理论基础。
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