【摘 要】
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目的观察高葡萄糖作用下蛋白激酶C（PKC）δ对人肾小管上皮细胞株（HK-2）p66Shc转录后蛋白磷酸化及线粒体转位的影响。方法以HK-2细胞作为体外观察的细胞，采用不同浓度的D-葡萄糖进行刺激，分别用实时定量PCR（RT-PCR）和Western印迹法检测PKCδ和p66Shc基因表达及蛋白磷酸化水平；然后将HK-2细胞分为3组：5 mmol/L低葡萄糖组、30 mmol/L高葡萄糖组、30 m
【机 构】
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410011长沙,中南大学肾脏病研究所湖南省血液净化与肾脏病重点实验室湘雅二医院肾内科,410011长沙,中南大学肾脏病研究所湖南省血液净化与肾脏病重点实验室湘雅二医院肾内科,410011长沙,中南大
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目的观察高葡萄糖作用下蛋白激酶C（PKC）δ对人肾小管上皮细胞株（HK-2）p66Shc转录后蛋白磷酸化及线粒体转位的影响。
方法以HK-2细胞作为体外观察的细胞，采用不同浓度的D-葡萄糖进行刺激，分别用实时定量PCR（RT-PCR）和Western印迹法检测PKCδ和p66Shc基因表达及蛋白磷酸化水平；然后将HK-2细胞分为3组：5 mmol/L低葡萄糖组、30 mmol/L高葡萄糖组、30 mmol/L高葡萄糖+粗糠紫苦素（Rottlerin）1.0μmol/L组。采用Western印迹法和细胞免疫荧光方法检测p66Shc蛋白磷酸化水平及其线粒体转位情况。
结果高葡萄糖处理HK-2细胞后，PKCδ和p66Shc mRNA及蛋白磷酸化水平明显高于对照组[其中PKCδmRNA及其磷酸化蛋白的表达量随着D-葡萄糖浓度（15、30、45 mmol/L）的增加分别上调0.9、1.3和1.6倍及0.4、1.5和2.0倍，均P<0.05]，且呈剂量和时间依赖；高糖+Rottlerin组p66Shc蛋白磷酸化水平及其线粒体转位明显低于对照组，(高糖+ Rottlerin组在180 min时线粒体p66Shc磷酸化蛋白表达量下调3.1倍，P<0.01）。
结论高葡萄糖可诱导HK-2细胞PKCδ和p66Shc的转录及磷酸化，PKCδ可促进高葡萄糖诱导的p66Shc磷酸化及其线粒体转位。
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