【摘 要】
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目的构建粉尘螨cDNA表达文库.方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotI dT18 作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链.加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA
【机 构】
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深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,南京医科大学分子生物学研究所
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目的构建粉尘螨cDNA表达文库.方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotI dT18 作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链.加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/Not I/EcoR I/CIP载体的Not I和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库.检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析.结果已成功构建一个含4.8×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平
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