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目的构建人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus，HCMV)立即早期蛋白1(IE1)真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1，将其转染小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞株，观察IE1蛋白在细胞中的表达及其对小鼠巨噬细胞Raw264.7分泌细胞因子功能的影响，为进一步研究HCMV的致病机制奠定实验基础。
方法双酶切pQE30-IE1，回收目的基因IE1，亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)，筛选、鉴定阳性克隆得pcDNA3.1(-)-IE1；提取质粒pcDNA3.1(-)-IE1，通过SuperFectTM脂转染试剂将质粒pcDNA3.1(-)-IE转染Raw264.7细胞，利用Western-blot鉴定IE1蛋白的表达，并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β的表达水平。
结果①双酶切pcDNA3.1(-)-IE1后，琼脂糖电泳可分别见到大小约为5.4kb和1.5kb片断，即pcDNA3.1(-)载体与IE1基因；②Western-blot分析证实pcDNA3.1(-)-IE1能在Raw264.7细胞中表达IE1蛋白；③细胞转染质粒后24h，ELISA法测定细胞上清液中TNF-α、IL-1β表达水平，在pcDNA3.1(-)-IE1组中的表达水平明显增高(p＜0.05)。
结论①成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1；②pcDNA3.1(-)-IE1能在Raw264.7细胞中表达；③IE1的表达可上调巨噬细胞TNF-α、IL-1β的表达水平。