【摘 要】
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为制备高亲和力的大豆凝集素(SBA)单克隆抗体,本试验以50 μg SBA蛋白/200 μL乳化液/只的剂量免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和灵敏性.选择血清
【机 构】
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河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳471003;河南农业大学生命科学学院,河
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为制备高亲和力的大豆凝集素(SBA)单克隆抗体,本试验以50 μg SBA蛋白/200 μL乳化液/只的剂量免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和灵敏性.选择血清效价和灵敏性较好的小鼠进行细胞融合.通过有限稀释亚克隆筛选出能稳定分泌SBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株.采用体内诱生腹水法批量制备SBA单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定.结果 表明,SBA免疫的4只小鼠中,1号小鼠效价最高且灵敏性最好,半数抑制浓度(IC5o)为571.4 μg·L-1.选取该小鼠进行细胞融合,并最终得到1株杂交瘤细胞,命名为5B4E10.制备的SBA单克隆抗体的效价达到1:409 600以上,IC50为82.04 μg·L-1,亚型为IgG1型,亲和力常数(Ka)为1.83×109 L·mol-1.且该抗体与大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和其他抗营养因子无交叉反应.本研究结果为建立大豆及其制品中SBA的免疫学检测方法奠定了良好的抗体基础.
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