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目的
探讨持续低温灌注保存设备肾脏灌注运转箱(LifePort)对离体猪肾组织结构的影响。
方法取体重为50~55 kg的雄性猪的肾脏5对,肾动脉连同腹主动脉一同取下,将摘取的双侧肾脏同时进行常规低温生理盐水灌洗,待肾脏颜色变为黄白色后,随机选取一侧肾脏,置入生理盐水(0~4 ℃)中常规保存(非灌注组),另一侧肾脏以Lifeport低温(0~4 ℃)持续灌注(灌注组),灌注液为生理盐水,灌注压力为3.33 kPa(25 mmHg)。分别在灌注后2、4、6、8、10和12 h时,于肾脏背侧楔形切取肾脏组织,进行下述观察,同时在相应保存时间点取非灌注组的肾脏组织作为对照。所取肾脏组织进行HE染色观察组织学变化;进行免疫组化染色观察白细胞介素(IL)-1、IL-10和肿瘤坏死因子((TNF-α)等的表达情况。
结果灌注组灌注时间在6 h之内者,肾小管管腔打开,肾小球饱满(无破坏),肾小囊扩张(无破坏)。免疫组化染色显示,IL-1开始出现,并集中于肾小管上皮细胞;灌注6~8 h时,肾小管管腔开放更加明显,肾小球饱满充盈,肾小管上皮细胞较之前无明显变化,IL-1表达较灌注6 h内者有所增多;灌注超过8 h后,可以见到肾小球及肾小囊出现破坏,肾小管开放及上皮细胞的形态与6 h内者没有明显变化,IL-1表达也与6 h者相似;整个实验观察时间段内IL-10和TNF-α的表达始终阴性。非灌注组肾脏在观察时间内(2~12 h),HE染色显示肾小管未开放,肾小管上皮细胞水肿明显,并较灌注组严重,IL-1表达与灌注组相似。IL-10和TNF-α表达均为阴性。
结论使用LifePort在适宜灌注压下持续低温灌注对肾脏保护有一定意义,但灌注持续时间最好不超过6 h。