【摘 要】
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[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法.[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250～ 500 μm的不锈铜筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进
【机 构】
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中国热带农业科学院海口实验站,海南海口570102海南省香蕉遗传改良重点实验室,海南海口570102;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源
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[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法.[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250～ 500 μm的不锈铜筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测.[结果]运用孔径在250～500 μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞.悬浮细胞系诱发后7d是一个比较恰当的过滤去除时间点.[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除.在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌.这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染.
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