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摘要 应用凝胶渗透色谱（GPC）和气相色谱（GC）技术，建立了大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的分析方法。样品经GPC全自动凝胶净化定量浓缩联用仪净化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行分离测定。 本方法的检出限为4 mg/kg。TBHQ在检测范围内具有良好的线性，在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面积呈线性相关，相关系数为0.999 6。加标油样的回收率在88.3%～95.4%之间，相对标准偏差（RSD）小于4%。
关键词 大豆油；特丁基对苯二酚；凝胶渗透色谱；气相色谱仪
中图分类号 TS221 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0273-02
Abetract Using gel penetration chromatography （GPC） and gas chromatography （GC） technique to establish analysis method of soybean oil antioxid-ant tertiary butyl hydroquinone （TBHQ）. Sample by GPC automatic gel purification quantitative concentration spectrometer purification， HP-5 （30 m× 0.32 mm，0.25 μm） for the separation and deter mination of chromatographic column.The detection limit was 4 mg/kg.TBHQ had a good linearity in the detection range，the concentration in the range of 1～1 000 mg/L and the peak area was linear correlation，the correlation coefficient was 0.999 6.Recovery rate of oil sample was between 88.3% and 95.4%.The relative standard deviation （RSD） was less than 4%.
Key words soybean oil；TBHQ；gel permeation chromatography；gas chromatography
氧化是導致食品品质变劣的重要因素之一，特别是在食用油或者含油量较高的食品中更是如此。大豆油是日常生活中主要的一种食用油，为了防止大豆油氧化酸败，延长货架期，市售大豆油往往需要在其中添加适宜的抗氧化剂[1-3]。特丁基对苯二酚作为油溶性抗氧化剂的新型产品，它的抗氧化能力大于2，6-二叔丁基对甲苯（BHT），被广泛用于延迟或阻止食品油脂的氧化变质中。
食用油脂中TBHQ常用的分析方法有比色法、气相色谱法、液相色谱法，但这些前处理方法比较繁琐，同时样品油脂得不到充分的净化[2-4]。该文采用凝胶渗透色谱/气相色谱法测定大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚，具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点。
1 材料与方法
1.1 试验仪器与试剂
1.1.1 供试仪器。7683 Series自动进样器；GPC全自动凝胶净化-定量浓缩联用仪：Free StyleTM ；氢火焰离子化检测器（FID）；旋转蒸发仪：HEIDOLPH；漩涡混合器： IKA GENIUS 3；电子天平：梅特勒-托利多ML204；6890N气相色谱仪：Aglient。
1.1.2 供试试剂。TBHQ标准品（纯度99%）：农业部环境保护科研检测所；环己烷、乙酸乙酯均为色谱纯；市售一级大豆油。
1.2 气相色谱分析条件
HP-5非极性毛细管柱（30 m×0.32 mm i.d）， 膜厚0.25 μm （Aglient，USA） ；进样口温度：250 ℃；FID检测器温度：250 ℃；程序升温：初始温度80 ℃，保留1 min，以10 ℃/min速度升至220 ℃，保持稳定1 min；载气流速1.2 mL/min，高纯氮气。
1.3 GPC条件
GPC柱填料为BioBeads S- X3 200～400目，规格（200 mm×22 mm i.d.），流动相乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）， 进样量 5 mL， 流速为5.0 mL/min， 样品收集时间9～16 min。
1.4 样品处理
准确量取大豆油样0.5 g（精确值0.1 mg）， 用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至10.0 mL，过Ф25 0.45 μm有机膜，漩涡混合2 min，按1.3条件对样品进行处理，将收集液在30 ℃下真空旋转蒸发至近干，再用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至2 mL。进样量1.0 μL。按照1.2条件进行气相色谱分析。
2 结果与分析
2.1 GPC净化条件优化
取TBHQ标准样品10 mL，按照1.3条件进行处理，收集9～16 min的流出液，然后在30 ℃下真空旋转蒸发，准确定容至2 mL，按照1.2条件使用气相色谱进行检测，标准品、空白样品加标气相色谱图见图1。
2.2 GPC收集时间的确定
以收集时间为横坐标，以色谱图峰面积为纵坐标绘制TBHQ随时间流出曲线图，具体见图2。可以看出，TBHQ集中在9～16 min流出，因此初步确定流出时间为9～16 min。
2.3 未知样品中TBHQ的含量测定 利用本方法对市售的8种样品进行检测，由分析结果可知，TBHQ均未检出。
2.4 方法的线性关系与检出限
按照3倍信噪比进行计算，方法的检出限约为4 mg/kg。对系列标准工作溶液按照上述色谱条件进样分析，以峰面积定量，从而得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程：Y=2 472X 1.330，保留时间为12.035 min，相关系数R2=0.9 996。
2.5 方法的回收率
在空白大豆油样品中分别添加0.1、0.4、1.0 mg/mL的TBHQ标准溶液， 3次重复，按上述色谱条件进行检测，测定TBHQ的加标回收率分别为88.3%、92.6%、95.4%，相对标准偏差均小于4%，精密度良好，满足分析要求。
3 结论
应用凝胶渗透色谱（GPC）和气相色谱（GC）技术，建立了大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的分析方法。样品经GPC全自动凝胶净化定量浓缩联用仪净化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行分离测定。 本方法的检出限为4 mg/kg。TBHQ在检测范围内具有良好的线性，在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面積呈线性相关，相关系数R2=0.999 6。加标油样的回收率在88.3%～95.4%之间，相对标准偏差（RSD）小于4%。该方法具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点，适用于大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的检测[7-8]。
4 参考文献
[1] 许华，穆同娜，李伟.凝胶渗透色谱/气相色谱法测定食用油脂中抗氧化剂特丁基对苯二酚[J].食品科技，2007，35（6）：217.
[2] 余以港，黄伟，林华山.特丁基对苯二酚（TBHQ）应用与检测[J].粮食与油脂，2003 （3）：42- 43.
[3] 游飞明，翁其香.气相色谱法快速测定油脂及加工食品中的BHA、BHT、TBHQ[J]. 福建分析测试，2005，14（4）：2290-2292.
[4] 张淑玲，张志胜，邢晓慧.气相色谱法测定食品中的抗氧化剂BHA，BHT，THBQ[J].现代生物医学进展，2008，8（12）：2483-2484.
[5] 程航，郭肖媚，梁莹，等.气相色谱法测定饲料中的特丁基对苯二酚[J].饲料研究，2011（8）：48-49.
[6] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫局.食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定：GB/T 23373—2009[S].北京：中国标准出版社，2009.
[7] 袁勇军，戚向阳，曹少谦，等.脉冲强光及抗氧化剂对大豆油过氧化的影响[J].核农学报，2011（5）：975-979.
[8] 张敬尧，张东杰.天然抗氧化剂在大豆油脂中抗氧化活性的研究[J].中国酿造，2009（3）：24-26.
关键词 大豆油；特丁基对苯二酚；凝胶渗透色谱；气相色谱仪
中图分类号 TS221 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0273-02
Abetract Using gel penetration chromatography （GPC） and gas chromatography （GC） technique to establish analysis method of soybean oil antioxid-ant tertiary butyl hydroquinone （TBHQ）. Sample by GPC automatic gel purification quantitative concentration spectrometer purification， HP-5 （30 m× 0.32 mm，0.25 μm） for the separation and deter mination of chromatographic column.The detection limit was 4 mg/kg.TBHQ had a good linearity in the detection range，the concentration in the range of 1～1 000 mg/L and the peak area was linear correlation，the correlation coefficient was 0.999 6.Recovery rate of oil sample was between 88.3% and 95.4%.The relative standard deviation （RSD） was less than 4%.
Key words soybean oil；TBHQ；gel permeation chromatography；gas chromatography
氧化是導致食品品质变劣的重要因素之一，特别是在食用油或者含油量较高的食品中更是如此。大豆油是日常生活中主要的一种食用油，为了防止大豆油氧化酸败，延长货架期，市售大豆油往往需要在其中添加适宜的抗氧化剂[1-3]。特丁基对苯二酚作为油溶性抗氧化剂的新型产品，它的抗氧化能力大于2，6-二叔丁基对甲苯（BHT），被广泛用于延迟或阻止食品油脂的氧化变质中。
食用油脂中TBHQ常用的分析方法有比色法、气相色谱法、液相色谱法，但这些前处理方法比较繁琐，同时样品油脂得不到充分的净化[2-4]。该文采用凝胶渗透色谱/气相色谱法测定大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚，具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点。
1 材料与方法
1.1 试验仪器与试剂
1.1.1 供试仪器。7683 Series自动进样器；GPC全自动凝胶净化-定量浓缩联用仪：Free StyleTM ；氢火焰离子化检测器（FID）；旋转蒸发仪：HEIDOLPH；漩涡混合器： IKA GENIUS 3；电子天平：梅特勒-托利多ML204；6890N气相色谱仪：Aglient。
1.1.2 供试试剂。TBHQ标准品（纯度99%）：农业部环境保护科研检测所；环己烷、乙酸乙酯均为色谱纯；市售一级大豆油。
1.2 气相色谱分析条件
HP-5非极性毛细管柱（30 m×0.32 mm i.d）， 膜厚0.25 μm （Aglient，USA） ；进样口温度：250 ℃；FID检测器温度：250 ℃；程序升温：初始温度80 ℃，保留1 min，以10 ℃/min速度升至220 ℃，保持稳定1 min；载气流速1.2 mL/min，高纯氮气。
1.3 GPC条件
GPC柱填料为BioBeads S- X3 200～400目，规格（200 mm×22 mm i.d.），流动相乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）， 进样量 5 mL， 流速为5.0 mL/min， 样品收集时间9～16 min。
1.4 样品处理
准确量取大豆油样0.5 g（精确值0.1 mg）， 用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至10.0 mL，过Ф25 0.45 μm有机膜，漩涡混合2 min，按1.3条件对样品进行处理，将收集液在30 ℃下真空旋转蒸发至近干，再用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至2 mL。进样量1.0 μL。按照1.2条件进行气相色谱分析。
2 结果与分析
2.1 GPC净化条件优化
取TBHQ标准样品10 mL，按照1.3条件进行处理，收集9～16 min的流出液，然后在30 ℃下真空旋转蒸发，准确定容至2 mL，按照1.2条件使用气相色谱进行检测，标准品、空白样品加标气相色谱图见图1。
2.2 GPC收集时间的确定
以收集时间为横坐标，以色谱图峰面积为纵坐标绘制TBHQ随时间流出曲线图，具体见图2。可以看出，TBHQ集中在9～16 min流出，因此初步确定流出时间为9～16 min。
2.3 未知样品中TBHQ的含量测定 利用本方法对市售的8种样品进行检测，由分析结果可知，TBHQ均未检出。
2.4 方法的线性关系与检出限
按照3倍信噪比进行计算，方法的检出限约为4 mg/kg。对系列标准工作溶液按照上述色谱条件进样分析，以峰面积定量，从而得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程：Y=2 472X 1.330，保留时间为12.035 min，相关系数R2=0.9 996。
2.5 方法的回收率
在空白大豆油样品中分别添加0.1、0.4、1.0 mg/mL的TBHQ标准溶液， 3次重复，按上述色谱条件进行检测，测定TBHQ的加标回收率分别为88.3%、92.6%、95.4%，相对标准偏差均小于4%，精密度良好，满足分析要求。
3 结论
应用凝胶渗透色谱（GPC）和气相色谱（GC）技术，建立了大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的分析方法。样品经GPC全自动凝胶净化定量浓缩联用仪净化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行分离测定。 本方法的检出限为4 mg/kg。TBHQ在检测范围内具有良好的线性，在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面積呈线性相关，相关系数R2=0.999 6。加标油样的回收率在88.3%～95.4%之间，相对标准偏差（RSD）小于4%。该方法具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点，适用于大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的检测[7-8]。
4 参考文献
[1] 许华，穆同娜，李伟.凝胶渗透色谱/气相色谱法测定食用油脂中抗氧化剂特丁基对苯二酚[J].食品科技，2007，35（6）：217.
[2] 余以港，黄伟，林华山.特丁基对苯二酚（TBHQ）应用与检测[J].粮食与油脂，2003 （3）：42- 43.
[3] 游飞明，翁其香.气相色谱法快速测定油脂及加工食品中的BHA、BHT、TBHQ[J]. 福建分析测试，2005，14（4）：2290-2292.
[4] 张淑玲，张志胜，邢晓慧.气相色谱法测定食品中的抗氧化剂BHA，BHT，THBQ[J].现代生物医学进展，2008，8（12）：2483-2484.
[5] 程航，郭肖媚，梁莹，等.气相色谱法测定饲料中的特丁基对苯二酚[J].饲料研究，2011（8）：48-49.
[6] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫局.食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定：GB/T 23373—2009[S].北京：中国标准出版社，2009.
[7] 袁勇军，戚向阳，曹少谦，等.脉冲强光及抗氧化剂对大豆油过氧化的影响[J].核农学报，2011（5）：975-979.
[8] 张敬尧，张东杰.天然抗氧化剂在大豆油脂中抗氧化活性的研究[J].中国酿造，2009（3）：24-26.