【摘 要】
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目的建立检测人Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR4的基因表达水平,探讨TLR4基
【机 构】
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第二军医大学附属长征医院实验诊断科、全军临床免疫中心
【基金项目】
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国家自然科学基金(30080027);上海市科技发展基金(02JC14005)
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目的建立检测人Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR4的基因表达水平,探讨TLR4基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pGEM-T-TLR4作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。在GeneAmp5700型检测仪上测定了50例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和40名健康对照者外周血中TLR4mRNA的含量。结果TLR4mRNA在50例冠心病患者的表达范围为7·7×105~2·3×107拷贝/μgRNA;40名健康对照者的表达范围为9·8×104~5·5×106拷贝/μgRNA,冠心病组TLR4mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5·3±3·8)×106vs(1·8±1·4)×106;P<0·01]。而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4 mRNA平均拷贝数无明显差别[(5·1±4·7)×106vs(5·4±3·0)×106;P>0·05]。结论成功建立了人TLR4基因表达含量的荧光定量检测方法;冠心病患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组,且其含量高低与血脂无关,TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性。
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