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目的
构建耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的psm-mec缺失突变株,并对psm-mec的功能进行初步研究。
方法运用药敏试验、DNA序列分析技术筛选psm-mec上下游序列与S.epidermidis标准菌株RP62A完全一致且四环素和氯霉素敏感的MRSE。利用融合PCR和温度敏感性穿梭质粒构建同源重组质粒pBT2-Δpsm-mec,经鉴定后电转金黄色葡萄球菌RN4220进行修饰,提取质粒后电转用于构建缺失突变的临床分离MRSE,经同源重组后筛选和鉴定psm-mec缺失突变株。分析缺失突变株与野生株生物被膜形成能力的差异,验证psm-mec与MRSE生物被膜的关系。
结果通过序列比对和药敏试验筛选和鉴定了3株用于构建psm-mec缺失突变的临床分离MRSE。通过同源重组,筛选和鉴定获得psm-mec缺失突变株。与相应的野生株比较,3株缺失突变株生物被膜形成能力明显降低,提示psm-mec可诱导MRSE生物被膜形成。
结论成功获得耐甲氧西林表皮葡萄球菌psm-mec缺失突变株,psm-mec与表皮葡萄球菌生物被膜形成相关。