【摘 要】
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以鲜切荸荠为材料,通过p H 7.5 Tris-HCl缓冲液浸提得到类黄酮3’-羟化酶（flavonoid3′-hydroxylase,F3’H）粗酶液,然后采用硫酸铵分级沉淀、透析、二乙氨乙基（dicthylaminoethy
【基金项目】
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国家自然科学基金地区科学基金项目(31360414)
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以鲜切荸荠为材料,通过p H 7.5 Tris-HCl缓冲液浸提得到类黄酮3’-羟化酶（flavonoid3′-hydroxylase,F3’H）粗酶液,然后采用硫酸铵分级沉淀、透析、二乙氨乙基（dicthylaminoethyl,DEAE）-纤维素离子交换层析及Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化,最终所得纯化酶的纯化倍数达到14.01,比活力提高到478.49 U/mg,回收率为6.38%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE）进行纯度鉴定,已达到电泳纯,测定得到其分子质量约为53.09 k D。纯化酶F3′H的最适温度为30℃,最适p H值为7.5;以柚皮素作为底物,测得该酶的米氏常数（Km）为1.08 mmol/L,最大反应速率(vmax)为416.67 U/（min·m L）;对于酶活性,高浓度的Na+表现出微弱的抑制作用,Ca2+和柠檬酸具有强烈的抑制作用,而Fe2+、Mg2+、NADPH和VC却表现出强烈的激活作用。
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