论文部分内容阅读
目的构建人谷草转氨酶(AST)高效重组表达体系。方法优化编码人 AST的核苷酸密码子,合成人 AST新的基因,并将其克隆至 pRSF-Duet表达载体中,转化大肠杆菌 BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白的表达,并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件,以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化,以 SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质,对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的 AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以