【摘 要】
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为利用硒原子的反常散射获取抗烟毒素蛋白晶体Ｘ射线衍射的相位信息，以质粒 ＰＱＥ－３０为表达载体，Ｅ．ｃｏｌｉ Ｍ１５为宿主菌，在含有硒代甲硫氨酸的Ｍ９培养基中用ＩＰＴＧ诱导表达硒代甲硫氨酸抗烟毒素蛋白衍生物．通过
【机 构】
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清华大学生物科学与技术系结构生物学实验室!教育部蛋白质科学实验室; 北京100084; 清华大学生物科学与技术系结构生;
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为利用硒原子的反常散射获取抗烟毒素蛋白晶体Ｘ射线衍射的相位信息，以质粒 ＰＱＥ－３０为表达载体，Ｅ．ｃｏｌｉ Ｍ１５为宿主菌，在含有硒代甲硫氨酸的Ｍ９培养基中用ＩＰＴＧ诱导表达硒代甲硫氨酸抗烟毒素蛋白衍生物．通过 Ｎｉ－ＮＴＡ金属亲合层析和 Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子交换层析纯化目标蛋白．产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检验纯度达９５％以上，经 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ和 ＥＳＩ－Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ质谱检测证实抗烟毒素蛋白硒代甲硫氨酸标记成功．采用与抗烟毒素蛋白晶体生长类似的条件，获得了衍生物可供衍射的晶体．
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