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为实现利用生物酶转化法进行D-对羟基苯甘氨酸的工业化生产,构建了3株海因酶基因工程菌。利用PCR技术从恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)CPU 9801染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因。通过将海因酶全基因插入pMD18-T质粒、海因酶基因的编码区与pET 17-b质粒重组、海因酶基因编码区和T7强启动子一起插入pMD18-T质粒分别得到重组质粒pMD-dht、pET-dht和pMD-T7-dht。将上述重组质粒分别转化大肠杆菌(Escherichi