【摘 要】
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根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列，利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针，从猪细小病毒感染的PK．15细胞中提取DNA，经PCR扩增VP2基因，纯化的PCR
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南省动物性食品安全重点实验室
【基金项目】
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河南省杰出人才创新基金项目(0621002100)
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根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列，利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针，从猪细小病毒感染的PK．15细胞中提取DNA，经PCR扩增VP2基因，纯化的PCR产物克隆入pGEM-TEasy载体中，构建重组质粒．转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线．在25此扩增反应体系中，对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化，建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序．该方法能够特异
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