检测微小RNA(miRNA,miR)-9在乳腺癌组织中的表达,分析其在乳腺癌发生发展中所发挥的功能;在体外通过功能获得或失去实验观察miR-9对乳腺癌细胞生长及转移能力的影响,并探讨其相关的调控机制。
方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测40例乳腺癌组织及其配对的周边非肿瘤组织中miR-9的表达量,分析其表达与肿瘤临床病理参数之间的关系。采用细胞增殖实验(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷,EdU法)、侵袭及迁移实验(Transwell法)及Western blot实验研究miR-9对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响及相关的调节机制。
结果miR-9在乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MCF-7中的相对表达量分别为0.027±0.002与0.032±0.004,显著低于癌旁的非肿瘤组织及正常的乳腺上皮细胞株MCF-10-2A(分别为0.059±0.044与0.068±0.016;P<0.01);此外,miR-9的表达量与乳腺癌患者肿瘤的大小、淋巴转移及肿瘤分期相关。体外功能学实验结果表明:与miR-ctrl组比较,凋亡、增殖、侵袭及迁移率分别为(5.2±0.6)%、(10.8±0.9)%、(54.3±6.7)%、(127.5±9.8)%,过表达miR-9可促进MCF-7细胞的凋亡[(10.5±2.3)%,P<0.05],抑制MCF-7细胞的增殖[(5.7±1.9)%,P<0.05]、侵袭[(35.3±14.8)%,P<0.05]及迁移能力[(90.4±6.9)%,P<0.05];相反,当抑制miR-9的表达时,可明显抑制MCF-7细胞的凋亡[(1.4±1.1)%,P<0.05],但却显著促进其增殖[(14.5±2.3)%,P<0.05]、侵袭(67.1±5.5,P<0.05)及迁移能力(145.4±8.6,P<0.05)。Western blot结果进一步表明,miR-9可通过转录后调节La蛋白域家族成员1(LARP1)的表达而在细胞中发挥上述生物学效应。
结论在体外过表达miR-9可抑制肿瘤细胞的增殖及转移能力。