热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达

来源 :中国医学科学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heixue5555
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目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化?
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