【摘 要】
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目的探讨不同载体结构在成肌细胞中表达hFⅨ蛋白的效果，优化载体结构，为血友病B基因治疗提供实验依据。方法制备带有两拷贝肌酸激酶增强子(Me2)和内含子m2的三种逆转录病毒载体
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目的探讨不同载体结构在成肌细胞中表达hFⅨ蛋白的效果，优化载体结构，为血友病B基因治疗提供实验依据。方法制备带有两拷贝肌酸激酶增强子(Me2)和内含子m2的三种逆转录病毒载体pLMe2Ⅸm2SN(Me2正向插入3＇LTR的增强子区域)、pLMe2Ⅸm2SN(Me2反向插入)及pLⅨm2SN，筛选高效表达hFⅨ的PA317细胞克隆，稳定转染成肌细胞，分别对单克隆及混合克隆的上清和细胞进行ELISA、PCR等检测及鉴定，并与pLⅨSN载体相比较。结果不同逆转录病毒载体转染靶细胞后hFⅨ表达水平依次为LMe2Ⅸm2SN(正向)>LMe2Ⅸm2SN(反向)>LⅨm2SN>LⅨSN；增强子方向不同的两个载体表达水平差异有显著性，正向插入者蛋白表达量较反向插入者高；靶细胞中反向插入的Me2在5＇LTR中有不同程度的缺失，其方向未发生变化。结论选择组织特异性增强子及优化FⅨ微小基因结构是提高表达水平的有效手段，正向插入增强子的载体能稳定表达外源基因。
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