【摘 要】
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[目的]研究与紫萍半叶状体衰老相关的内肽酶及其性质.[方法]采用明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析与衰老相关的内肽酶同工酶.通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度,可以使正
【机 构】
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天津科技大学食品工程与生物技术学院,南开大学生命科学学院,哈尔滨工业大学威海分校
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[目的]研究与紫萍半叶状体衰老相关的内肽酶及其性质.[方法]采用明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析与衰老相关的内肽酶同工酶.通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度,可以使正染的蛋白质标准条带和负染的内肽酶条带同时显现出来,从而了解内肽酶的表征分子量.将进行电泳、复性后的聚丙烯酰胺凝胶切成相同大小的条带,分别置于含有同等浓度蛋白酶抑制剂[2 mmol/L丝氨酸型内肽酶抑制剂(PMSF)、2 mmol/L金属型内肽酶抑制剂(EDTA)、25 μmol/L半胱氨酸型内肽酶抑制剂(E-64)]的酶反应缓冲液中进行反应,同时以不加抑制剂的胶条处理5 d的样品作为对照,以分析内肽酶类型.[结果]衰老紫萍半叶状体的内肽酶同工酶谱上共出现6种内肽酶.其中,内肽酶HEP1、HEP2、HEP4和HEP6在衰老过程中出现,且活性受细胞分裂素的调控,可能是衰老相关的内肽酶.经过蛋白酶抑制剂的分析结果表明,与对照相比,E-64未能对内肽酶条带HEP1产生抑制作用,而EDTA和PMSF都能抑制内肽酶活性,且EDTA作用较明显,因此,初步鉴定分子量为120 kD的HEP1为金属型内肽酶,其他3种内肽酶均为半胱氨酸型内肽酶.[结论]在紫萍半叶状体衰老早期金属型内肽酶活性较强,而在衰老后期半胱氨酸型内肽酶大量出现并具有较高的活性.
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