【摘 要】
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本研究通过串联启动子方式实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800中的高效分泌表达。通过对几种现有报道的强启动子的比较并对其进行串联操作,确定生产纳豆激酶的最优启动子及纳豆
【机 构】
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江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31400078);国家高技术研究发展计划(863计划)(2014AA021304);江苏省产学研联合创新资金-前瞻性联合研究项目(BY2014023-21)
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本研究通过串联启动子方式实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800中的高效分泌表达。通过对几种现有报道的强启动子的比较并对其进行串联操作,确定生产纳豆激酶的最优启动子及纳豆激酶的最高产量。本研究首先在枯草芽孢杆菌WB800中成功构建五种含不同强启动子的重组质粒p SG101(PHpaII),p SG102（PBcapr E）,p SG103（Plux S）,p SG104（Pgsi B）和p SG105（Pyxi E）,实现纳豆激酶分泌表达,并对其纤溶活性进行测定。结果表明,启动子PHpaII介导的纳豆激酶纤溶活性（110.80 FU/m L）明显优于其他四种启动子。通过对启动子PHpaII进行多次串联,成功构建质粒p SG106(PHpaII-PHpaII),p SG107(PHpaII-PHpaII-PHpaII)和p SG108(PHpaII-PHpaII-PHpaII-PHpaII)。数据显示,菌株Bacillus subtilis WB800/p SG107(PHpaII-PHpaII-PHpaII)纳豆激酶产量最高为213.30 FU/m L,相比单个启动子PHpaII,提高了92.51%。通过对五种强启动子的比较以及对其进行串联操作,成功实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800的高效表达,纤溶活性最高为213.30 FU/m L,与现有相关报道相比有明显优势。
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