【摘 要】
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目的 构建新型双重调控肿瘤特异性增殖型腺病毒载体治疗系统.方法 通过基因重组技术构建受端粒酶逆转录酶启动子控制腺病毒E1A表达、缺氧反应元件启动子控制E1B表达并携带人
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目的 构建新型双重调控肿瘤特异性增殖型腺病毒载体治疗系统.方法 通过基因重组技术构建受端粒酶逆转录酶启动子控制腺病毒E1A表达、缺氧反应元件启动子控制E1B表达并携带人内皮抑素基因的质粒pTPHre-hEndo.将质粒pTPHre-hEndo与含有腺病毒右臂的质粒pB-GHE3共转染至293细胞中同源重组得到带抗肿瘤基因的双重调控增殖型腺病毒AdTPHre-hEndo.用TCID50方法测定病毒滴度.通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力.利用ELISA法检测人内皮抑素抗癌基因的表达.结果 成功构建了由双重调控的选择增殖型腺病毒AdTPHre-hEndo,病毒滴度为3.25×1010pfu/ml.增殖实验结果证实AdTPHre-hEndo可以选择性地在端粒酶阳性的胰腺癌细胞中增殖.随着感染时间的延长,肿瘤细胞培养上清液中内皮抑素表达量不断增加,第7天达(310.25±1.41)ng/ml,明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体(112.53±4.41)ng/ml.结论 AdTPHre-hEndo具有高效表达人内皮抑素和在胰腺癌细胞内增殖的能力,为胰腺癌的生物治疗提供了一种新型的基因-病毒治疗系统.
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