论文部分内容阅读
【摘要】 目的：建立色谱法分离鉴定葛根素原料药中4种有关物质含量的方法体系。方法：采用C18色谱柱，流动相：甲醇-乙腈(6：4)，流速：1.O ml·min-1，检测波长：320 nm。结果：咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素分别在0.04 -0.48 g、0.08-0.96 g、0.02-0.24 g、0.02-0.10范围内呈良好的线性关系。RSD分别为=1.25%、0.78%、0.59%和0.45%。结论：色谱法分类鉴定心脉通分散片中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素的含量，操作简单，灵敏度高，结果准确，因此，可以作为该心脉通分散片实际生产中的质量控制标准。
【关键词】 高效液相色谱法；心脉通分散片；咖啡酸；阿魏酸；异阿魏酸；葛根素
心脉通分散片由当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、葛根等六味药组成，具备活血化瘀、降压降脂、通脉养心、降压降脂等作用。葛根素为本品中主药之一，其所含葛根素具有降低血压、扩张冠脉、增加脑血流量及降低血管阻力等作用。不过心脉通分散片在质量控制上只进行简单的检查项目，不能有效的控制制剂的质量。为有效控制质量，本文采用高效液相色谱法测定心脉通分散片中葛根素等4种有效物质的含量，现将结果报告如下。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，RE52AA旋转蒸发仪(上海生物工程仪器厂)，BS110型电子天平(北京三博系统有限公司)，TG332A型微量分析天平(江苏分析天平厂)。KQ3200DE型医用数控超声仪(昆山市超声仪有限公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯(北京化工分公司)，无水乙醇，冰醋酸均为分析纯，试验用水为三蒸水。心脉通分散片(批号：20100715、20100716、20100717)，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。咖啡酸对照品(批号110753-200413)、阿魏酸对照品(批号110770-200611)、葛根素对照品(批号110752-200511)，异阿魏酸(批号111698-200602)。均购自中国药品生物制品检定所，纯度都大于98%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱温：30℃，流动相：甲醇-乙腈(6：4)；流速：1.0 ml·min-1，检测波长：320nm，进样量：20μl。图1就为在上述条件下的心脉通分散片色谱图。
2.2 样品提取 取心脉通分散片内容物，研细，取0.30 g，精密称定，置索氏提取器中，加入甲醇50 ml，加热回流提取至无色，蒸干甲醇，残渣加甲醇溶解并定容至50 ml，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 m微孔滤膜滤过，滤液作为样品溶液。
2.3 对照品的配置 精密称取咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素对照品，加流动相制成含100、110、120、130ug/mL的对照品溶液。同时按心脉通分散片的组成处方及生产工艺，分别制备缺咖啡酸阴性样品，缺阿魏酸阴性样品、缺异阿魏酸阴性样品和缺葛根素阴性样品，按照“2.2”方法制得阴性样品溶液，经过色谱分析，阴性样品溶液对试验结果无干扰。
2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品混合溶液1、2、4、6、8、10、12μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以各对照品进样质量对峰面积进行线性回归，结果表明咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素分别在0.04 -0.48 g、0.08-0.96 g、0.02-0.24 g、0.02-0.10范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验 对照品溶液1 ml置10 ml量瓶中，浓度按色谱条件连续进样6次，RSD分别为=1.25%、0.78%、0.59%和0.45%，表明该法精密度良好。
2.6 稳定性实验 取同一批样品，平行6份，分别于0，2，4，8，12，24h在色谱测定样品的咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素含量，求得RSD为1.5%、1.8%、1.6%和0.8%，表明样品溶液在24h内稳定。
2.6 样品含量测定 取样品制成供试品溶液，进样2O?l测定，照外标法(峰面积)计算含量。结果见表1。
表1：样品含量测定结果(ug/ml,n=3)
3 讨论
咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素为心脉通分散片中的主要药味，其主要有效成分为葛根素，为有效控制制剂质量，我们采用高效液相色谱法测定了葛根素的含量。经过色谱分析，发现320nm波长下咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的吸收均较大，图谱特征性强。采用甲醇-乙腈溶液梯度洗脱，分离效果好，重现性强。
总之，色谱法分类鉴定心脉通分散片中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素的含量，操作简单，灵敏度高，结果准确，因此，可以作为该心脉通分散片实际生产中的质量控制标准。
参考文献
[1] 潘瑞乐，陈迪华，沈建刚，等.高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量[J].药物分析杂志，2000，20(6)：396-398
[2] 宋金春，唐开勇，王宗春.葛根川芎前液中葛根素和阿魏酸的含量测定[J].中国医院药学杂志，2006，26(4)：426-428．
[3] 陆炜琨，曾芳，李媛.反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量[J].广东药学院学报，2008，24(5)：475-477．
[4] 邹安华.高效液相色谱法测定心康胶囊中葛根素的含量[J].白求恩军医学院学报.2010 5(1)：33-34．
[5] 张玉军，路玫.高效液相色谱法测定降糖舒分散片中葛根素的含量[J].广西医学，2008，30(12)：1902-1903．
[6] 丁爱英，李艳茹，曲佳，等.十味降糖胶囊葛根中葛根素的HPLC含量测定[J].齐鲁药事，2009，28(1)：22-24．
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005：223
【关键词】 高效液相色谱法；心脉通分散片；咖啡酸；阿魏酸；异阿魏酸；葛根素
心脉通分散片由当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、葛根等六味药组成，具备活血化瘀、降压降脂、通脉养心、降压降脂等作用。葛根素为本品中主药之一，其所含葛根素具有降低血压、扩张冠脉、增加脑血流量及降低血管阻力等作用。不过心脉通分散片在质量控制上只进行简单的检查项目，不能有效的控制制剂的质量。为有效控制质量，本文采用高效液相色谱法测定心脉通分散片中葛根素等4种有效物质的含量，现将结果报告如下。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，RE52AA旋转蒸发仪(上海生物工程仪器厂)，BS110型电子天平(北京三博系统有限公司)，TG332A型微量分析天平(江苏分析天平厂)。KQ3200DE型医用数控超声仪(昆山市超声仪有限公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯(北京化工分公司)，无水乙醇，冰醋酸均为分析纯，试验用水为三蒸水。心脉通分散片(批号：20100715、20100716、20100717)，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。咖啡酸对照品(批号110753-200413)、阿魏酸对照品(批号110770-200611)、葛根素对照品(批号110752-200511)，异阿魏酸(批号111698-200602)。均购自中国药品生物制品检定所，纯度都大于98%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱温：30℃，流动相：甲醇-乙腈(6：4)；流速：1.0 ml·min-1，检测波长：320nm，进样量：20μl。图1就为在上述条件下的心脉通分散片色谱图。
2.2 样品提取 取心脉通分散片内容物，研细，取0.30 g，精密称定，置索氏提取器中，加入甲醇50 ml，加热回流提取至无色，蒸干甲醇，残渣加甲醇溶解并定容至50 ml，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 m微孔滤膜滤过，滤液作为样品溶液。
2.3 对照品的配置 精密称取咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素对照品，加流动相制成含100、110、120、130ug/mL的对照品溶液。同时按心脉通分散片的组成处方及生产工艺，分别制备缺咖啡酸阴性样品，缺阿魏酸阴性样品、缺异阿魏酸阴性样品和缺葛根素阴性样品，按照“2.2”方法制得阴性样品溶液，经过色谱分析，阴性样品溶液对试验结果无干扰。
2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品混合溶液1、2、4、6、8、10、12μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以各对照品进样质量对峰面积进行线性回归，结果表明咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素分别在0.04 -0.48 g、0.08-0.96 g、0.02-0.24 g、0.02-0.10范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验 对照品溶液1 ml置10 ml量瓶中，浓度按色谱条件连续进样6次，RSD分别为=1.25%、0.78%、0.59%和0.45%，表明该法精密度良好。
2.6 稳定性实验 取同一批样品，平行6份，分别于0，2，4，8，12，24h在色谱测定样品的咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素含量，求得RSD为1.5%、1.8%、1.6%和0.8%，表明样品溶液在24h内稳定。
2.6 样品含量测定 取样品制成供试品溶液，进样2O?l测定，照外标法(峰面积)计算含量。结果见表1。
表1：样品含量测定结果(ug/ml,n=3)
3 讨论
咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素为心脉通分散片中的主要药味，其主要有效成分为葛根素，为有效控制制剂质量，我们采用高效液相色谱法测定了葛根素的含量。经过色谱分析，发现320nm波长下咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的吸收均较大，图谱特征性强。采用甲醇-乙腈溶液梯度洗脱，分离效果好，重现性强。
总之，色谱法分类鉴定心脉通分散片中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和葛根素的含量，操作简单，灵敏度高，结果准确，因此，可以作为该心脉通分散片实际生产中的质量控制标准。
参考文献
[1] 潘瑞乐，陈迪华，沈建刚，等.高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量[J].药物分析杂志，2000，20(6)：396-398
[2] 宋金春，唐开勇，王宗春.葛根川芎前液中葛根素和阿魏酸的含量测定[J].中国医院药学杂志，2006，26(4)：426-428．
[3] 陆炜琨，曾芳，李媛.反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量[J].广东药学院学报，2008，24(5)：475-477．
[4] 邹安华.高效液相色谱法测定心康胶囊中葛根素的含量[J].白求恩军医学院学报.2010 5(1)：33-34．
[5] 张玉军，路玫.高效液相色谱法测定降糖舒分散片中葛根素的含量[J].广西医学，2008，30(12)：1902-1903．
[6] 丁爱英，李艳茹，曲佳，等.十味降糖胶囊葛根中葛根素的HPLC含量测定[J].齐鲁药事，2009，28(1)：22-24．
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005：223