【摘 要】
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目的构建含有重组SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,转染真核细胞Eca-9706并检测SV40大T抗原基因在真核细胞内的表达。方法以PCR方法从含有SV40大T抗原基因的质
【机 构】
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郑州大学第一附属医院检验科,郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
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目的构建含有重组SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,转染真核细胞Eca-9706并检测SV40大T抗原基因在真核细胞内的表达。方法以PCR方法从含有SV40大T抗原基因的质粒上扩增出SV40大T抗原基因作为靶基因;将其连接至pGEM-TEasy载体上,并对靶基因进行DNA测序确认;再将靶基因与慢病毒表达载体pLentiGFP重组构建成为pLentiGFP-Tag;以脂质体介导转染真核细胞Eca-9706,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR检测SV40大T抗原基因在细胞内的表达水平。结果成功克隆SV40大T抗原基因,经由DNA测序确认;成功筛选出含SV40大T抗原基因正插子的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag;转染真核细胞Eca-9706后48 h,观察到绿色荧光的广泛表达并检测出宿主细胞内高效表达的SV40大T抗原mRNA。结论成功构建含SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,并观察到SV40大T抗原在真核细胞中的成功表达。
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