【摘 要】
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目的利用5’端锚定引物及多重聚合酶链反应(PCR)技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量(Mr)标准(DNA标志物)制备中的应用。方法针对常用的pMD1
【机 构】
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西北农林科技大学生命科学学院; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划)(2006CB504100);国家科技重大专项课题(2009ZX09503-002,2009ZX09301-002,2009ZX09103-616);国家自然科学基金课题(30900862,30800196,30771230)
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目的利用5’端锚定引物及多重聚合酶链反应(PCR)技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量(Mr)标准(DNA标志物)制备中的应用。方法针对常用的pMD19-T载体(2692 bp)序列,利用命令行程序pd4marker.py,结合Primer3及多因素引物特异性评估软件MFEprimer,设计5’端锚定的上游引物和7对扩增不同目的片段的下游引物;其次,以转化有pMD19-T载体的大肠杆菌DH5α菌液为模板,分别进行一至七重PCR扩增;并将扩增产物经2%琼脂糖凝胶分离及凝胶成像仪采集图像分析;最后,评估该方法在核酸Mr标准制备中的应用。结果制备了特异性较好的一至七重PCR扩增产物,可针对不同实验目的进行不同核酸Mr标准的制备。结论建立了一种快速、特异性扩增核酸片段的锚定多重PCR方法,可根据不同实验目的,快速制备出不同Mr标准大小的核酸片段,进一步拓展了PCR技术的应用范围。
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