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目的
通过离子通道芯片及Western blot实验证实先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)病变肠段的钾离子通道表达与正常的结直肠存在差异。
方法2012年8月到2013年12月在哈尔滨医科大学附属第一医院手术治疗先天性巨结肠患儿30例,通过病史、直肠测压、钡剂灌肠造影、术中冰冻及术后病理等确诊为HD,术中结肠切除完成后,分别取正常及病变狭窄段肠组织,大小为1.0 cm×1.0 cm;标本置入液氮中冻存以待进一步实验。取其中6组标本,应用人类神经离子通道PCR芯片(neuronal ion channels PCR array)进行筛选表达具有差异性的钾离子通道;全部30例标本应用Western blot检测所筛选出钾离子通道的表达情况。结果采用Image-Pro Plus魔棒选取蛋白条带,利用IOD算法计算条带灰度。
结果我们将表达变化在2倍以上的基因认定为是差异表达基因,从而通过芯片筛选出表达具有差异性的钾离子通道15个,其中无神经节肠段表达增强1个,表达降低14个,共包括电压门控性的钾离子通道9个、大电导Ca2+激活的K+通道2个、小电导Ca2+激活的K+通道2个、内向整流性钾离子通道2个。利用Western blot验证大电导Ca2+激活的K+通道的Maxi K通道及电压门控性钾离子通道的Kv11.1通道α亚基蛋白的表达。并经统计学分析,认定差异具有显著差异性。
结论先天性巨结肠结肠组织中确实存在表达下调的钾离子通道。