SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因

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Histag/NiNTA系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。SDSPAGE是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测Histag融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个Histag融合蛋白P73His时,首先用SDSPAGE法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对其进行C末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析,结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Histag在内的部分肽段使SDSPAGE法测量蛋白分子量的偏差大大降低,证实Histag确实是造成偏差的原因之一。推测由于Histag中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在SDSPAGE中迁移变慢,而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。
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