人脑源性神经生长因子基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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用聚合酶链反应(PCR)以人脑DNA为模板,扩增了人脑源性神经营养因子(BDNF)成熟序列的DNA片断并将此DNA片段克隆到载体PBV220中,对重组质粒进行PCR鉴定,限制性酶切分析和序列测定后,确定其为含BDNF DNA的重组质粒,将该质粒转染到大肠杆菌(DH5α)中,通过温度诱导其表达,其表达量占菌体总蛋白的15%,用兔抗人BDNF进行蛋白质印迹分析(Westernblot)后,在表达产物位置(14Kd)出现特异性条带,证实该产物为BDNF。
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