柠檬酸的紫外分光光度测定法

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1 原理 柠檬酸(柠檬酸盐)在柠檬酸裂解酶(CL)的催化作用下被分解为草醉乙酸和乙酸(1)。 (1)柠檬酸~(CL)→草酰乙酸+乙酸 在苹果酸脱氢酶(MDH)和L—乳酸脱氢酶(L—LDH)存在的情况下,草酰乙酸和其脱羟产物丙酮酸被还原态的烟酰胺腺瞟吟二核苷酸(NADH)分别还原成 L—苹果酸和L—乳酸(2)(3)。 (2)草酰乙酸+NADH+H+~(MDH)→L—苹果酸+NAD~+ (3)丙酮酸+NADH+H+~(L—LDHF)→L—乳酸+NAD~+ 在反应式(2)(3)中被氧化的NADH量与被测柠檬酸的量可按化学反应式计算,NADH的测定可根据其在波长334、340或365nm处的吸光度来计算。
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