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目的
探讨Latexin(Lxn)基因对CD133+MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响。
方法采用磁珠分选法从MIAPaca-2胰腺癌细胞株中分选出CD133+细胞,在无血清培养基中观察其形态变化及种植到裸鼠皮下后的成瘤能力。采用脂质体法将不同浓度的插入Lxn基因(1、3、5 μg)的质粒转染CD133+ MIAPaca-2胰腺癌细胞。应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测转染的癌细胞Lxn mRNA及蛋白表达量。CCK-8法检测转染癌细胞的增殖能力。
结果成功分离出CD133+MIAPaca-2胰腺癌细胞,它以悬浮成球的方式生长,以1×105个癌细胞种植裸鼠皮下的成瘤率达100%。转染插入Lxn的质粒后,CD133+MIAPaca-2胰腺癌细胞Lxn基因的表达呈转染剂量依赖性地增加,转染5 μg质粒的细胞Lxn mRNA及蛋白表达量分别为20.80±0.98、16.80±2.73,显著高于未转染细胞的1.02±0.01、1.01±0.01,差异均有统计学意义(P值均<0.05);转染后癌细胞增殖活性呈转染剂量及培养时间依赖性地被抑制,转染0.4 μg质粒的癌细胞的生长抑制率达36.2%,显著高于未转染细胞的抑制率,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论CD133+ MIAPaca-2胰腺癌细胞具有肿瘤干细胞部分特性,Lxn基因转染对CD133+MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖具有抑制作用。